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目的:银屑病是一种T淋巴细胞介导的慢性炎症性皮肤病,在T细胞活化,跨越内皮细胞并归巢至皮肤的过程中趋化因子及其受体起着至关重要的作用。本研究探讨CC族趋化因子受体4(CCR4)在寻常型银屑病患者与健康人外周血中的表达差异,及其与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)的相关性,并检测CCR4配体胸腺活化调节趋化因子(CCL17)、巨噬细胞源性趋化因子(CCL22)在银屑病皮损中的表达情况,探讨CCR4在银屑病发病机制中的作用。 方法:实验一:采用流式细胞仪检测寻常型银屑病患者外周血CCR4、CX3CR1在T细胞表达率,并与健康人群及同一患者治疗前后进行比较。病例组:为经过临床或病理检查证实为寻常型银屑病的患者38例,年龄19~65岁,平均年龄42.55±13.99岁,病程6个月~50年,平均9.25±9.60年,根据病情进展情况分为进行期、静止期及退行期,并根据皮损面积和表现进行PASI评分;其中8例银屑病患者在经过基础治疗2-6周后,皮损PASI评分改善达到PASI75。正常对照组20例,来自于体检中心及本院研究生,性别与年龄同实验组匹配。病例组及对照组均抽取静脉血2ml,EDTA抗凝,提取外周血PBMC后加入流式荧光抗体,分别上机观察样品管中CCR4及CX3CR1在淋巴细胞中的表达比例。 实验二:实验组选取北京朝阳医院皮肤科门诊2014年至2016年收治的银屑病患者石蜡标本10例、对照组为2014年至2015皮肤科及整形科手术切取得正常皮肤皮损蜡块,采用免疫组化技术对上述组织的石蜡切片分别检测CCL17和CCL22的表达情况。实验结果根据阳性细胞百分比进行半定量分析,并应用统计学方法进行组间比较。 结果:1、流式细胞术检测银屑病患者外周血中CCR4表达情况 (1)外周血中,银屑病组CD4+CCR4+占CD4+T淋巴细胞的比例是(14.92±7.63)%高于正常人对照组(8.5±0.98)%,差异有统计学意义(p<0.01)。同时CD4+CX3CR1+细胞占CD4+T淋巴细胞的比例(13.56±5.25)%与对照组(5.49±2.53)%有明显差异(p<0.01)。银屑病组CD8+CCR4+占CD8+T淋巴细胞的比例是(21.19±10.36)%与正常人对照组(18.29±6.43)%差异不大(p>0.01)。同时CD8+CX3CR1细胞占CD8+T淋巴细胞的比例(41.61±15.78)%与对照组(30.13±13.30)%无明显差异(p>0.01)。而PASI评分与各组表达强度之间无明显相关性(r值分别为-0.089、0.008、0.071、-0.253)。 (2)治疗前,入选患者外周血CCR4在CD4+T细胞和CD8+T细胞的表达率均高于正常对照组,差异有统计学意义。治疗后,银屑病患者CCR4在CD8+T细胞的表达率与治疗前比较差异无统计学意义,而在CD4+T细胞中表达率较前降低。 2、免疫组织化学检测银屑病皮损区域CCL17、CCL22的表达结果如下 (1)CCL17表达:CCL17在正常人真皮血管内皮细胞未见表达,少量阳性颗粒主要位于基底层和角质层。在寻常型银屑病皮损中表皮基底层,棘层,颗粒层及血管内皮细胞中表达阳性率显著增强,同正常皮肤相比有显著性差异。 (2)CCL22表达:CCL22在正常人阳性表皮表达较弱,少量淡黄色颗粒主要位于角质层和基底层。在寻常型银屑病颗粒层,棘层,基底层及真皮浅层血管内皮细胞阳性表达明显。正常皮肤同皮损处皮肤表达阳性率比较有显著性差异(P=0.02)。 结论:1、CCR4在寻常型银屑病患者外周血CD4+淋巴细胞中高表达,与健康对照组表达差异具有统计学意义,并且在治疗前后其下降程度具有统计学差异,但与银屑病患者PASI评分无显著相关,提示CCR4可能参与了银屑病发病机制中T细胞活化迁移的过程。 2、银屑病患者皮损内趋化因子CCL17和CCL22在银屑病斑块中表皮层及真皮微血管内皮均可见阳性表达,同之前体内实验结果相一致,其参与银屑病机制可能是通过活化的表达趋化因子受体CCR4的T淋巴细胞向表皮产生定向的迁移和聚集,故而使循环中的炎症细胞向表皮募集。