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目的:有文献提示自身免疫肺气肿大鼠CD4~+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域处于低甲基化状态同时伴有肺泡隔细胞凋亡,推测上述区域的低甲基化状态可能诱导自身免疫肺气肿大鼠肺泡隔细胞凋亡的形成。为探讨二者的关系,我们将体外穿孔素启动子区低甲基化处理的CD4~+T淋巴细胞注射到正常大鼠腹腔中,观察其肺泡隔细胞凋亡及肺组织病理的改变,为进一步研究肺气肿的发病机制及寻找新的治疗方法提供思路。方法:将30只健康清洁级SD大鼠随机分为模型组、对照组、假手术组。模型组:分选出正常SD大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞,加入含有甲基化抑制剂5-氮胞苷(5-Azacytidine,5-Aza)的细胞培养基中(5-Aza浓度:10μmol/l)孵育72小时,取1×10~7个细胞离心去上清,加完全弗氏佐剂1ml及磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS)1ml,腹腔注射其他正常SD大鼠1次,该组大鼠设为模型组,另取上述未打入大鼠体内的1×10~7个细胞检测上述区域甲基化水平,设为细胞组1;对照组:分选出正常大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞加入不含5-Aza的培养基中孵育72小时,取1×10~7个细胞离心去上清,加完全弗氏佐剂1ml及PBS 1ml腹腔注射其他正常SD大鼠1次,该组大鼠为对照组,另取上述未打入大鼠体内的1×10~7个细胞离心去上清后检测上述区域甲基化水平,标为细胞组2;假手术组:完全弗氏佐剂1ml+PBS 1ml腹腔注射正常SD大鼠1次。饲养21天后取各组大鼠右下肺行石蜡切片、苏木素-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色,计算平均内衬间隔(Mean Linear Intercept,MLI)和平均肺泡数(Mean Alveolar Numbers,MAN);制备血清及左肺支气管肺泡灌洗液(Broncho Alveolar Lavage Fluid,BALF)标本,以酶联免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测其抗内皮细胞抗体(Antiendothelial Cell Antibodies,AECA)含量;用免疫组化二步法测肺组织血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达;脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-Mediated dUTP Nick End Labeling,TUNEL)检测肺泡隔细胞凋亡,计算凋亡指数(Apoptosis Index,AI);提取大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞DNA,以重亚硫酸盐扩增子测序法(Bisulfite Amplicon Sequencing,BSAS)测上述区域甲基化水平。结果:(1)与对照组、假手术组相比,模型组MAN降低,MLI升高,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)模型组血清及BALF中AECA浓度以及VEGF、AI均高于对照组及假手术组(以上P均<0.05);(3)5-Aza干预的细胞(细胞组1)穿孔素启动子区域甲基化水平较无5-Aza干预的细胞(细胞组2)甲基化水平降低(P<0.05),模型组大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化水平低于对照组及假手术组(P<0.05);(4)对照组与假手术组比较,上述所有指标无明显差异(P均>0.05);(5)模型组大鼠穿孔素基因启动子区域甲基化水平与AI、AECA、MLI、MAN、VEGF指标相关性分析:穿孔素启动子区甲基化水平与MAN呈正相关(r=0.747,P<0.05);与AI、AECA(血清及BALF)、MLI、VEGF呈负相关(r分别为-0.789、-0.746、-0.661,-0.743,-0.660,P<0.05)。结论:(1)5-Aza可降低体外培养的大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化水平;(2)5-Aza处理的大鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞可能通过其穿孔素基因启动子区域甲基化水平的降低诱发大鼠肺泡隔细胞凋亡,促进AECA、VEGF表达及自身免疫性肺气肿的形成。