船蛆中纤维素降解菌群筛选与构建、鉴定及酶学性质研究

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本课题使用采自中国大连旅顺盐场海域的船蛆和大连交通大学校园内一处花园土作为样品,分离筛选高活性纤维素降解菌。其中,船蛆菌为主,辅以活性较好的土壤菌进行研究,以期为进一步用于降解天然纤维素奠定基础。以CMC-Na或滤纸为唯一碳源培养菌株,通过刚果红染色、滤纸条崩解等方法,从船蛆全组织匀浆和花园土中筛选出6株好氧菌;摇瓶复筛12d测得,其中土壤菌T14912的Cx酶活最高,达18.19U/mL,船蛆菌S4713和S2321次之,平均Cx酶活分别为13.95U/mL和11.65U/mL。摇瓶发酵第6d时,定量测得船蛆菌S4713具有四种活性大小不同的纤维素酶,即内切葡聚糖酶活(Cx)>β—葡萄糖苷酶活(β-Gase)>全酶活(FPA)>外切葡聚糖酶活(C1),表明S4713的全酶活并非其它三种酶活的简单加和,而是这三种酶协同降解纤维素的结果:pH、温度对S4713各种纤维素酶活的影响均呈单峰曲线,且最适pH和最适温度均有所不同,总体上,四种酶的最适pH和最适温度范围分别在6.5~7.5,50~60℃利用6株高效纤维素降解菌两两复配构建复合菌群,其中S2321+T14912协同产酶作用最为显著,其Cx、FPA平均酶活分别为20.89、6.42U/mL。摇瓶发酵12d中,,各发酵液产Cx酶最佳时间大约在4~7d,而产FPA酶最佳时间大约在4~8d。通过形态学观察、生理生化特征和16S rDNA系统发育分析,得知这6株菌均为革兰氏阳性菌,芽孢为椭圆形,且居中不膨大,有菌毛;初步鉴定S3212和S4941为弯曲芽孢杆菌属,而S4933为弯曲芽孢杆菌属或短小芽孢杆菌属(Bacillu pumilus)其中的一种;与参照菌株Bacillus flexus DSM1320T相比,鉴定S2321、T14912为弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus),S4713可能为弯曲芽孢杆菌属的一个新亚种。
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