合成草鱼生长激素特异肽抗原的研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:davidphoenix
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该研究选择草鱼作为研究对象,①对草鱼和鲤鱼GH氨基酸序列进行比较,综合考虑选定序列有最小的同源性、最大的亲水性、最大的抗原决定簇等参数,设计出能特异性识别草鱼GH的12肽序列,其中11个氨基酸来源于草鱼GH序列,在羧基端外加1个半胱氨酸以利于与载体连接;②预测出的抗原肽段利用Merifield固相法合成原理,在ABI430型自动多肽合成仪上合成,利用质谱仪来估测合成多肽的纯度和分子结构,多肽纯度达96﹪以上;③合成的多肽用MBS法与大蛋白KLH偶联;④将此复合肽作为抗原免疫新西兰大白兔,建立草鱼GH多克隆抗体体系,制备出特异性强、滴度高的GH多克隆抗体来进行免疫检测,其结果如下:Western blot免疫分析结果显示,草鱼GH与兔抗草鱼GH血清能发生结合反应,在PVDF膜上呈现一条分子量为22KD的显色带.免疫交叉反应表明,草鱼GH抗血清只与草鱼GH特异结合,而与鲤鱼GH没有交叉反应.该试验创立了抗原肽检测草鱼GH基因的研究方法;通过抗原-抗体之间的特异性结合关系,证实所制备的抗血清能与有活性的草鱼GH发生特异性反应.应用ELISA和Western blot技术,进行草鱼GH基因的免疫定量研究,为建立草鱼GH转录产物和表达蛋白质的检测方法奠定了基础;为在翻译水平上检测基因的表达部位和表达量提供了一种新的手段.因此也可为建立快捷、准确、灵敏的转基因鱼检测方法提供科学依据.
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