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本文通过分子生物学和生理生化两个角度对ALS抑制剂与ALS作用机理进行了初步的研究。 1、用乙酰乳酸合成酶(ALS)活性测定方法研究了3种ALS抑制剂类除草剂(双草醚、苄嘧磺隆、KIH-6127)对水稻(粳稻、籼稻)、稗草和油菜ALS活性的抑制差异性。体外测定结果表明，不同植物ALS对双草醚和KIH-6127的敏感性差异较大，粳稻、稗草和油菜ALS的敏感性强于籼稻，而这些植物ALS对苄嘧磺隆的敏感性差异很小。体内结果显示，双草醚和KIH-6127对稗草和油菜ALS的抑制作用较强，对粳稻ALS的抑制作用可以恢复；苄嘧磺隆对油菜ALS的抑制作用也较强，但对稗草、水稻ALS基本无抑制作用；3种ALS抑制剂对籼稻ALS抑制作用均较弱。结果表明，不同植物对某些ALS抑制剂田间表现存在差异，不同植物ALS对这些ALS抑制剂敏感性差别是造成这种差异的原因之一。 2、为了从基因水平上探索ALS对抑制剂敏感性表现差别的原因，我们提取了水稻总RNA后合成cDNA，然后用PCR的方法得到了直播粳稻(秀水11)ALS基因编码区中的1266bp。氨基酸序列分析表明，与已在GenBank中登录的ALS抑制剂敏感型水稻品种的ALS基因同源性最高，达98.3％；与非敏感型水稻的同源性为97.9％，与同属禾本科的其它植物玉米、大麦、小麦、多花黑麦草、旱雀麦的同源性为90.1％～91.7％；与模式植物拟南芥和烟草的同源性分别为71.7％和72.9％；与十字花科植物油菜和箩卜的同源性均为71.9％，与其它植物ALS氨基酸序列的同源性也均在70％以上。同时发现，ALS氨基酸序列中的585和664处氨基酸的变化与水稻对ALS抑制剂敏感性有关。 3、为了得到纯的ALS用于抑制剂直接筛选，以及对ALS功能部位进行进一步的研究，将克隆的基因片段构建到杆状病毒-昆虫(细胞)表达系统的供体质粒pBacHTeGFPT中，通过转座作用将目的基因重组进穿梭载体Bacmid中，PCR检测转座成功。重组病毒Bacmid DNA在脂质体介导下转染粉纹夜蛾Tn细胞。细胞的CPE和荧光检查表明，重组病毒已成功转染细胞，与绿色荧光蛋白基因融合的水稻ALS基因部分编码区已经在昆虫细胞中得到表达。