目的： 研究重组腺病毒介导的野生型PTEN基因转染对赫赛汀耐药性乳腺癌耐药性的逆转作用。 方法： 1、构建包装出携带野生型PTEN基因的重组腺病毒Ad PTEN,采用重组腺病毒介导的基因转染方法,选用赫赛汀耐药性乳腺癌细胞株BT474作为研究对象,应用四唑盐(MTT)比色法和流式细胞仪(FCM)丙化碘碇(PI)单染色法检测Ad PTEN转染对BT474细胞增殖和凋亡的影响及对赫赛汀治疗的反应情况。 2、应用DNA片断化试验分析BT474凋亡与转染时间的关系；应用Westem blot法检测Ad PTEN转染对BT474中丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)的磷酸化水平的变化。 3、应用荷乳癌裸鼠模型进一步观察体内PTEN基因转染联合赫赛汀治疗对耐药性乳癌生长的影响,验证PETN基因转染逆转赫赛汀耐药的疗效。 结果： 1、TCID50法测定携带PTEN基因的重组腺病毒滴度为4.2×1011TCID50/ml; 2、用PCR、RT-PCR和Western blot法证实PTEN基因可被转导入BT474细胞内并稳定高效地转录和表达； 3、AdPTEN联合赫赛汀治疗强烈抑制BT474增殖,72h抑制率为55.18％,144h抑制率89.86％;FCM检测出现明显凋亡峰,凋亡细胞约占(20.7±5.83)％,并且出现G1期阻滞(65.41±2.38)％和S期明显减少(21.81±1.52)％,与AdLacZ组和对照组相比差异有显著意义(P<0.01); 4、转染组细胞DNA出现典型的梯形条带,尤以转染后24h-36h最为明显,AdLacZ组及对照组DNA基本无裂解。AdPTEN转染明显下调BT474乳癌细胞内Akt的磷酸化水平。Ad PTEN治疗可强烈抑制裸鼠体内种植瘤生长,明显抑制肿瘤增殖,促进耐药性乳癌细胞凋亡。 结论： Ad PTEN治疗可抑制BT474细胞中PI3激酶的磷酸化作用,阻断Akt的磷酸化,阻断PI3K/Akt信号通路的持续活化,恢复耐药细胞对赫赛汀的敏感性,引起细胞凋亡。