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电流及电位型电化学免疫传感器是将免疫分析技术与电化学传感器相结合的一种新型免疫分析方法,是基于测量电流、电位变化来进行免疫分析的生物传感器。电化学免疫传感器在临床医学、环境和食品工业等方面都有重要应用,并以其体积小、专一度强、灵敏度高、检测快速方便、成本低和容易实现实时在线活体检测等优点,成为当前研究的热点之一。抗原或抗体在敏感膜上的结合或继后的反应引起电流、电极电位或膜电位发生改变,而且这种变化与待测物浓度之间存在线性关系。其中将抗原或抗体,固定到换能器表面称为生物功能物质的固定化,固定化技术是免疫传感器的研究和开发中最为重要和关键的工作。本文利用纳米金、壳聚糖—纳米金复合材料,采用多种电极材料,运用包埋、沉积、吸附等手段固定抗体,直接测定抗原与抗体反应前后的电流、电位变化。1.基于电沉积和层层自组装技术,提出了一种新的生物分子固定化方法,研制成一种高灵敏电位型乙肝表面抗原免疫传感器。利用L-半胱氨酸(L-Cys)的双官能团结合双层纳米金,从而通过比表面积大,生物相容性好的纳米金胶吸附大量抗体,同时用聚乙烯醇缩丁醛(PVB)薄膜的笼效应把乙肝表面抗体(HBsAb)和纳米金固定在玻碳电极上,从而制得了高灵敏度、高稳定性的电位型免疫传感器。采用循环伏安法(CV)对电极的层层自组装过程进行了考察,并对该免疫传感器的性能进行了详细的研究。该免疫传感器线性范围是8.5~256.0ng·mL-1,线性相关系数为0.9978,灵敏度为89.0,检出限为3.1ng·mL-1。将其用于病人的血清样品分析,与ELISA法测得结果的符合率为92.5%。2.采用电化学还原HAuCl4在电极表面形成一层均匀的多孔纳米金(NG)层,增大电极的比表面积和响应信号,再利用L-半胱氨酸(L-Cys)中的巯基与Au形成强烈的金硫键将半胱氨酸固定在电极上,再利用半胱氨酸中带正电荷的氨基(—NH3+)通过正负电荷之间的静电作用吸附带负电荷的纳米金胶。最后通过吸附性能强,生物兼容性好的双层纳米金吸附乙肝抗体,从而制得乙肝免疫传感器。通过循环伏安法(CV)和交流阻抗技术(EIS)考察了电极表面的电化学特性,并对该免疫传感器的性能进行了详细的研究。该免疫传感器线性范围为1.28~128.0ng·mL-1,线性相关系数为0.9982,检出限为0.15ng·mL-1,将其用于病人的血清样品分析,与现行的ELISA法的结果相比较,符合率为88.9%。3.利用电沉积技术将电极表面修饰上一层普鲁士蓝作为电子媒介体,然后利用电化学还原HAuCl4在电极表面形成一层均匀的纳米金层,它既能阻碍普鲁士蓝的渗漏,又能直接吸附抗体,从而制得乙肝表面抗原免疫传感器。研究了电极修饰过程中的纳米金沉积时间、测试液pH值、温度等实验条件和参数对传感器性能的影响。该传感器在HBsAg浓度为2ng·mL-1~300ng·mL-1的范围内有良好的线性关系并且制作简单,响应快,能满足实际测定的要求。4.制备了纳米金-壳聚糖复合物,该复合物不仅集合了无机纳米材料和有机聚合物的优点,还具有完美的成膜性能和生物相容性。利用电沉积纳米金层与纳米金-壳聚糖复合物共修饰电极发展了制作简单,灵敏度、精密度、选择性和稳定性良好癌胚抗原免疫传感器。采用循环伏安法(CV)对电极的层层自组装过程进行了考察,并利用电子投射电镜表征了制得的复合物。该传感器在CEA浓度为0.2ng·mL-1~120ng·mL-1的范围内有良好的线性关系,对癌胚抗原的检出限为0.06ng·mL-1,灵敏度为1310nA/ng/mL。