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登革热在全球范围分布广泛,是传播最快的虫媒病之一,对公共医疗卫生造成了极大的负担。而超过半数的登革热患者表现为普通发热的症状或者无症状,所以仅仅通过临床症状上来判断是否被登革病毒(Dengue Virus,DENV)感染有很大难度,因此建立一种灵敏度高、特异性强的DENV检测方法就变得很重要。环介导的等温扩增(LAMP)恒温反应、反应时间短、灵敏度高、特异性强,被广泛用于检测各种流行性疾病。然而,引物(特别是3’端)与模板之间的错配将显著削弱LAMP的效率,限制其对于基因多样性的病原微生物的应用。本研究针对这一问题,对传统LAMP体系进行优化,首次将具有3’-5’的外切酶活性的高保真酶应用于DENV的RT-LAMP检测中。当LAMP引物的3’端出现各种错配时,错配碱基都会因为高保真酶的3’-5’的外切酶活性而被切除,该方法展现出了对错配极佳的抗性。在每25μl的LAMP体系中,本研究通过优化,高保真酶的量为0.15 U时效果最佳。当检测30000拷贝/反应的DENV-4野生型与突变型模板时,改良过的新型抗突变RT-LAMP的检测阈值比传统RT-LAMP快了5.6-22.6 min,新型方法的检测时间阈值与传统方法之间也显示出了极显著差异(P<0.01)。本研究改良了之前建立的一种检测DENV四种血清型的RT-LAMP方法。相比之前的方法,新方法展现了更高的灵敏度。针对四种血清型,新方法的检测限(limit of detection,LOD)分别为74、252、78和35拷贝/反应。本研究用改良过的DENV抗突变RT-LAMP方法检测了10种与登革热临床症状类似的病毒,检测结果全为阴性,表明了新方法的高度特异性。本研究收集了153个来自疑似DENV感染的病人的临床样本,其中94.8%的样本被检测为DENV阳性,检出率高于商业化NS1抗原方法(92.2%),实验室自建的RT-LAMP方法(78.4%)和传统RT-LAMP方法(86.9%)。此外,本研究通过在体系中加入HNB和甲酚红,建立了新型RT-LAMP方法的比色法可视化检测。本研究建立的抗突变RT-LAMP方法并不仅限于检测DENV,未来也完全有可能推广应用至寨卡、日本脑炎、基孔肯亚等虫媒病的检测,提高了检测灵敏度,缩短了检测时间,特别适合应用于资源匮乏的地区。