松茸和三色雷蘑血管紧张素转换酶抑制剂的分离纯化、结构及生物活性研究

被引量 : 0次 | 上传用户:tx_programming
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
高血压是影响人类健康的“无形杀手”,对高血压疾病的防治及治疗药物的研究是全球医学界面临的一项艰巨任务。血管紧张素转换酶(ACE)是肾素-血管紧张素(RAS)和激肽释放酶-激肽(KKS)这两个血压调控系统中起关键作用的酶。因此寻找安全性高且副作用小的食源性ACE抑制剂(ACEI)药物成为一个热门课题。食用菌不仅味道鲜美可口、营养丰富,还具有很高的药用价值,因此对食用菌中ACEI药物的研究有着广泛的应用前景。本研究分别从松茸和三色雷蘑的子实体中分离纯化得到一种ACE抑制肽TMP和一种ACE抑制蛋白LTP,并且对其结构、生理生化特性及生物学活性进行了研究。综合运用加热提取、超滤、离子交换层析及凝胶过滤层析的分离纯化手段,从松茸子实体中得到一个具有较高ACE抑制活性的肽段,命名为TMP,并且通过LC-MS/MS质谱分析得到其氨基酸序列为WALKGYK,分子量为865.04 Da,对ACE的IC50值为0.4μM。TMP在40-90℃具有良好的温度稳定性,90℃条件下孵育2 h对ACE仍有80%的抑制活性。在pH 2.0-11.0范围内也具有较好的稳定性,在pH 2.0的酸性条件下,仍然保留40%的ACE抑制活性。通过Lineweaver-Burk动力学模型测试,TMP属于非竞争性抑制剂。TMP在10mg/kg时表现出50%的DPPH自由基清除活性,20 mg/mL时对亚铁离子有24%的螯合能力。在单剂量短期原发性高血压大鼠(SHR)的体内降血压实验中,TMP和松茸水提物对SHR大鼠都具有降血压效果,其有效作用剂量分别是25 mg/kg和400 mg/kg,对SHR大鼠收缩压的降幅分别是18 mmHg和36 mmHgoTMP剂量为50 mg/kg时,对SHR大鼠收缩压的降幅为36 mmHg. TMP和松茸子实体水提物对大鼠的心率都没有影响。因此松茸及松茸ACE抑制肽TMP的研究为松茸开发成降血压功能性食品提供了理论依据。采用10 kDa超滤膜超滤、两次强阴离子交换柱层析及凝胶过滤层析的纯化技术,从三色雷蘑子实体中分离纯化出一个分子量为86 kDa的双亚基ACE抑制蛋白,命名为LTP,纯化倍数为12.7倍,回收率为0.9%,LTP对ACE的IC50值为1.64 mg/mL, N端序列为DGPTMHRQAVADFKQ,疏水性氨基酸比例为40%。采用LC-MS/MS质谱技术得到7条可信度较高的肽段氨基酸序列,并且这7条肽段的疏水性氨基酸残基所占比例最少为60%。LTP在pH 9.0的碱性环境孵育2 h后对ACE的抑制活性只有30%,在pH 2.0的酸性环境下孵育2 h后仍保留有60%的ACE抑制活性。LTP在不同温度下孵育2 h后,对ACE的抑制活性随温度的升高而逐渐降低,温度稳定性差。通过动力学参数Km和Vmax的变化及Lineweaver-Burk曲线测试,LTP属于竞争性抑制剂。三色雷蘑水提物和三色雷蘑ACE抑制蛋白LTP在200 mg/kg及100 mg/kg的剂量下,对SHR大鼠的收缩压都有显著的降低作用,其降幅分别是34 mmHg和43 mmHg,并且对大鼠的心率都没有影响。因此对三色雷蘑ACE抑制剂的研究为此食用菌的进一步开发利用提供了实验数据。
其他文献
目的:对陕西产秦艽Gentiana macrophylla根的化学成分进行系统研究。方法:利用多种色谱手段对秦艽的脂溶及水溶部分进行分离;用UV,IR,MS,1H-,13C-NMR等技术及对照品对照进行
<正>经济责任审计报告是反映任期经济责任审计工作成果和质量的最终载体。本文针对当前报告中存在的不规范问题提出一些建议。一、经济责任审计报告中的"名称"注意规范、统一
目的观察家庭护理干预在社区脑卒中护理中的应用效果及对患者健康状态的影响。方法将2012年3月至2014年3月于我院接受治疗的80例脑卒中患者作为研究对象,随机分为对照组与观
本文针对Krashen的输入假设,介绍了Swain提出的输出假设,着重讨论了输出的四大功能:引起注意、假设检验、元语言功能和增强流利性。在教学实践中,要重视语言输出以加强二语学
大环内酯类(Macrolides, MALs)抗生素对葡萄球菌、链霉菌等大多数革兰氏阳性菌和支原体具有突出的抗菌活性,在兽医临床上主要用于预防和治疗畜禽呼吸道和消化道疾病,但由于MA
针对现阶段我国“大街区-宽马路”与“居住小区”模式愈演愈烈的现象、居住小区功能与形式的单一与人们对城市生活多元化需求的矛盾、住区封闭导致与城市的隔离等问题,笔者提
汽车电子稳定程序(Electronic Stability Program,ESP)是汽车重要的底盘电子系统,能够提高汽车的稳定性和安全性。V字形开发流程已成为汽车电控系统的主流开发方法,硬件在环
<正>陈宝义教授为天津中医药大学第一附属医院儿科主任医师、研究生导师。为全国第二批老中医药专家学术经验继承指导老师,国家中医药管理局"优秀临床人才研修项目"指导老师,
【目的】探讨福建闽清毛脚鸡体尺性状与屠体性状的相关关系,为闽清毛脚鸡的选育提供依据。【方法】对闽清毛脚鸡的8个体尺性状(体斜长、胸宽、胸深、胸角、龙骨长、骨盆宽、