虾夷扇贝内脏酸性多糖的结构和抗凝血活性研究

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虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis),主要产自我国的辽宁省及山东省的沿海地区。随着扇贝资源加工的日益增长使得越来越多的副产物扇贝内脏不断富集,造成环境的污染和资源的浪费,因此合理有效利用这一资源成为需要解决的问题。本论文为解决这一问题,以虾夷扇贝的副产物内脏为原料,采用双酶酶解、醇沉及氯化十六烷基吡啶络合沉淀的方法得到粗多糖。用DEAE阴离子交换柱得到5种组分,分别为SVP1、SVP2、SVP3、SVP4和SVP5。选取得率最大的SVP2组分利用CL-6B凝胶色谱柱进行进一步的分离纯化,得到两种均一的多糖组分SVP2-1和SVP2-2。由福林酚染色法测得它们的蛋白含量分别为3.7%和5.5%,采用四羟基联苯法测得SVP2-1和SVP2-2的糖醛酸含量分别为2.2%和4.3%,采用明胶比浊法得到硫酸基的含量分别为8.1%和13.8%。采用凝胶色谱法由葡聚糖的标准曲线算得SVP2-1的分子量约为630KDa,而SVP2-2的分子量约为63KDa。通过扫描电镜可以看出两个组分的表面结构均为片状且表面光滑。结合液相色谱-质谱、核磁共振波谱和甲基化等技术进一步分析SVP2-1和SVP2-2的结构。从气相单糖组成可以看出二者均由不同比率的木糖、阿拉伯糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖和少量葡萄糖醛酸组成。从二糖的分析结果可以得到,SVP2-1和SVP2-2同样主要存在的二糖片段有己糖-糖醛酸(m/z 687),己糖-己糖(m/z 673)和脱氧己糖-己糖(m/z657)。通过两个组分的原样与脱硫样品的甲基化结果对比可以获得SVP2-1和SVP2-2的连接位点和硫酸基的取代位点。由结果可得二者的糖苷键类型繁多,推测在SVP2-1和SVP2-2中-SO4位于Man(1→的C-4和→3)Gal(1→的C-4。由部分酸水解可知SVP2-2的主链结构为主链结构为→6)Man_p(1→3)Gal_p(1→,且→3)Gal_p(1→的C-4位被Xly或Glc取代。最后,对两个组分的抗凝血活性进行分析,SVP2-1和SVP2-2具有浓度依赖性的抗凝血活性。硫酸化多糖SVP2-1和SVP2-2可以抑制内源性和共同途径的凝血因子凝固和凝血酶活性,并且可以抑制纤维蛋白原向纤维蛋白的转化。通过纤维蛋白原转化为纤维蛋白的抑制率结果以及活化部分凝血酶时间和凝血酶时间来看,SVP2-2具有比SVP2-1更好的抗凝血活性。
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