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氟中毒引起的非骨相组织损害已引起人们的广泛关注,其中氟的生殖毒性及对子代健康的影响已成为研究热点,而分子机理尚不完全清楚。饮水型氟中毒是由于长期大量饮用含氟量过高的水所引起的一种全身性疾病,是慢性地方性氟中毒的一种类型。本研究采用小鼠饮用含氟水(100mg/L)为动物模型,研究了氟对小鼠肝脏、精子和早期胚胎中基因组DNA甲基化和印迹基因DNA甲基化的影响,从表观遗传学的角度探讨氟的生殖毒性。1氟对小鼠肝脏DNA甲基化的影响为了解氟对小鼠肝脏中基因组DNA甲基化和逆转座子LINE1基因的DNA甲基化的影响,应用酶联免疫法(ELISA)和偏重亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析了雄鼠连续饮用含氟水35d后,肝脏中LINE1基因和基因组DNA甲基化的水平。结果显示,处理组和对照组中的基因组DNA甲基化水平分别是1.20%±0.11%和1.20%±0.14%,差异不显著；LINE1的DNA甲基化水平在处理组和对照组分别是85.00%±3.15%和81.87%±5.39%,差异不显著。表明雄鼠连续饮用含氟水35d不会直接影响肝脏中DNA甲基化水平。2怀孕雌鼠摄入氟对早期胚胎DNA甲基化的影响为了解早期孕鼠摄入氟对胚胎DNA甲基化的影响,应用BSP和结合偏重亚硫酸氢盐的限制性酶切分析(COBRA)分析了怀孕雌鼠连续摄入氟2d后,早期胚胎中印迹基因和逆转座子LINE1基因的DNA甲基化的水平。结果显示,氟暴露使早期胚胎H19的DNA甲基化从对照组中的49.33%±7.60%下降为9.12%±5.28%,差异显著；Peg3的DNA甲基化在处理组和对照组分别是4.14%±0.32%和4.66%±0.45%,差异不显著；LINE1的DNA甲基化在处理组和对照组分别是42.33%±7.99%和41.67%±7.42%,差异不显著,酶切结果进一步验证了测序所得的结果。表明孕鼠摄入氟会直接导致胚胎中父本印迹基因H19的DNA甲基化异常,而不会对母本印迹基因Peg3和逆转座子LINE1的DNA甲基化产生显著性影响。3雄鼠摄入氟对受精后早期胚胎DNA甲基化的影响为了解雄鼠摄入氟对受精后早期胚胎DNA甲基化的影响,应用BSP和COBRA分析了摄入氟的雄鼠与雌鼠交配后,早期胚胎中印迹基因和逆转座子LINE1基因DNA甲基化的水平。结果显示,受氟的影响,H19的DNA甲基化水平从原本的49.33%±7.60%下降为27.00%±8.54%,差异显著；Peg3的DNA甲基化水平,从对照组的4.66%±0.45%升高到处理组的96.55%±0%,差异显著；LINE1基因DNA甲基化水平在处理组和对照组分别是45.50%±7.66%和41.67%±7.42%,差异不显著,酶切结果进一步验证了测序所得的结果。表明雄鼠摄入氟会导致与之交配的雌鼠所得胚胎中H19和Peg3的DNA甲基化异常,而不会对LINE1基因的DNA甲基化产生显著性影响。4氟对小鼠精子DNA甲基化影响的研究为了解氟对精子DNA甲基化的影响,应用ELISA和BSP分析了雄鼠连续饮用含氟水35d后,精子中基因组DNA甲基化水平和H19、Rasgrf1、Peg31、LINE1基因的DNA甲基化水平。结果显示,H19的DNA甲基化水平在处理组和对照组分别是88.63%±5.14%和91.11%±0.95%；Rasgrfl的DNA甲基化水平在处理组和对照组分别是97.50%±1.12%和97.78%±1.21%；Peg3的DNA甲基化水平在处理组和对照组分别是0.71%±0.014%和0%±0%；LINE1的DNA甲基化水平在处理组和对照分别是85.96%±3.59%和90.06%±2.39%；基因组DNA甲基化水平在处理组和对照组分别是0.44%±0.13%和0.41%±0.10%,差异均不显著。表明雄鼠连续35d摄入氟不会直接影响精子中DNA甲基化水平。