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HER2阳性的乳腺癌恶性程度高、复发和转移发生早、预后差,对某些化疗药物有抵抗,并且HER2基因过度表达与患者较短的无病生存期和总生存期有密切关系。嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞是目前国际上最受关注的肿瘤细胞治疗技术之一,该技术通过在T细胞表面表达嵌合抗原受体,形成具有靶向性、克服肿瘤免疫逃逸能力、以及长久维持T细胞活性的新一代细胞治疗技术,在针对血液肿瘤的治疗中表现出了明显的治疗效果。然而,CAR-T细胞在治疗实体肿瘤时,由于潜在的脱靶毒性,使其安全性成为了其在实体瘤治疗应用上的重要瓶颈。国际上第一例CAR-T治疗死亡的案例就是为HER2阳性患者治疗时,引起正常肺组织表达的HER2受到CAR-T细胞攻击导致。因此,本研究旨在通过将CAR构建到NK-92MI细胞上,利用NK细胞不会产生白介素-6(IL-6)以及具有更短的体内存活时间的特点,来提高其安全性,为未来临床应用奠定基础。我们通过PCR以及常规分子克隆技术获得HER2-CAR片段,然后将其构建到慢病毒载体上,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染NK-92MI细胞,藉此比较用HER2分子的嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞(HER2-CAR-NK92MI)和未被基因修饰的NK-92MI细胞相比,能否提高对HER2阳性乳腺癌的杀伤效果。首先经病毒转染后,我们用流式检测HER2-CAR在NK-92MI细胞表面的表达情况,并检测HER2-CAR-NK92MI和未被基因修饰的NK-92MI细胞IFN-γ和颗粒酶的分泌差异,然后再用流式检测二者对乳腺癌细胞的体外杀伤效果,最后小鼠体内实验验证HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌原位肿瘤的杀伤作用。结果发现,HER2-CAR-NK92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7,T47D的杀伤效率分别为62.4%和50.0%,而未被HER2-CAR基因修饰的NK-92MI细胞对其杀伤效率只有22.1%和16.9%;同时HER2-CAR-NK92MI细胞对HER2阴性的肿瘤细胞MDA-MB-468的杀伤效率为13.6%,未被HER2-CAR基因修饰的NK-92MI细胞对其杀伤效率为12.7%,进一步的SCID小鼠乳腺癌原位移植动物模型试验也证实HER2-CAR-NK92MI细胞具有更好的杀伤效率。由此可以得出结论,经HER2嵌合抗原体受体修饰的NK-92MI细胞可特异性识别HER2分子,对HER2阳性的乳腺癌肿瘤细胞的杀伤效率显著高于未被基因修饰的NK-92MI细胞。