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选择了在生产上广泛应用的一定的基因型进行培养,首先对其愈伤组织分化为体细胞胚的的适宜条件进行探索,之后对其愈伤组织分化为体细胞胚的过程中与体胚发生关系密切的生化物质(如蛋白质含量、糖含量、丙二醛含量、棉酚含量、PPO活性、IAA氧化酶活性和抗氧化系统的SOD活性、CAT活性)的消长规律进行研究和比较,对棉花组织培养体细胞胚发生的生化机制和棉花体细胞胚发生过程中褐化现象严重的生化机制进行了探讨,得出如下结论:
1在下胚轴、子叶和侧根三种外殖体中,愈伤组织的诱导率:下胚轴>子叶>侧根。
22,4-D在愈伤组织的诱导中是必需的,适宜浓度是0.05~0.1mg/L。
3在2,4-D和KT浓度相同的情况下,IBA要比IAA对愈伤组织的诱导效果好。
40.1mg/L2,4-D+0.1mg/LKT+0.1mg/LIBA组合对愈伤组织的诱导效果最好。
5首次继代时间以45d的继代时间最好,随后继代时间30~35d为宜;经过3次继代培养,分化率最高。
6当培养基中不添加2,4-D,KT从0.1mg/L降到0.05mg/L,IBA或IAA从0.1mg/L降到0.01mg/L,胚性愈伤诱导率较高。
7可溶性蛋白含量变化是导致愈伤组织在生化特征和细胞功能存在差异的原因。可溶性糖提供愈伤组织生长发育所需能源,是蛋白及核酸合成的物质基础。
8SOD、CAT活性的变化与胚性愈伤组织的细胞分裂活跃和胚性维持有关。
9IAA氧化酶调节IAA水平,而IAA可能对愈伤组织形成和胚状体发生起促进作用,对胚性细胞的产生起抑制作用。
10PPO活性、MDA含量及棉酚含量与愈伤组织的褐化死亡呈正相关,PPO和棉酚促进胚性愈伤组织的形成。