为减轻骨关节炎患者在疾病发作期的急剧痛苦并改善长期预后治疗效果,我们提出了一个双管齐下的治疗新策略,通过两次复乳化法构建了一种可注射的“非甾体抗炎药-巨噬细胞极化因子”双层微球。通过对所制备的双层微球制剂形态表征、双层结构确证、体外释放行为、体外细胞毒性、巨噬细胞极化表征、体内药效学、体内安全性等方面进行探究,为炎症反应下的组织再生提供了一种有效的方法,为其进行临床及工业转化提供了初步的理论基础。具体研究内容如下:（1）共载两种药物的双层微球的制备、表征与释放行为考察采用两次复乳化法成功制备共载帕瑞昔布（PXB）和白介素-4（IL-4）的双层微球,所制备的双层微球形态圆整,分布均一,粒径多在8-10(μm之间。利用X射线衍射法、红外光谱和热重与差热分析法验证了两种药物分别被成功包载在内外层载体中,IL-4被包载于双层微球的内部,PXB大部分被外层载体包封。双层微球的外层药物PXB包封率为（91.31±1.2）%,载药量为（9.4±0.95）%,内层药物IL-4包封率为（69.41±3.17）%,载药量为（4.45±0.22）%。较高的包封率将有利于后续体内药效学实验一次性给药长期释放。体外释放实验结果显示,内层蛋白在偏酸性释放介质中释放迅速,2天的累积释放率超过50%,而在生理环境中释放缓慢,17天后才达到接近50%。PXB在pH6.8的释放体系中完全释放时间为9天,而第9天在pH7.4的释放体系中的累计释放率不到60%。两种药物在不同释放体系中的释放行为不同,PXB的快速释放有助于调节关节腔内的炎性环境,有助于内层蛋白类药物的长期缓慢释放。（2）体外实验验证双层微球的安全性及IL-4对巨噬细胞的极化作用选取RAW264.7和大鼠软骨细胞两种细胞为研究对象对双层微球的安全性进行体外初步评价。细胞活性均具有浓度依赖性,两种细胞在空白双层微球浓度62.5μg/mL及更低浓度中孵育时表现出良好的活力,而随着浓度的升高显示出抑制生长的趋势。RAW264.7在偏酸性环境下培养24小时和48小时后的细胞存活率分别降低13.0%和13.3%,而大鼠软骨细胞分别降低15.4%和19.2%,在酸性环境中两种细胞活力均会受影响,从另一方面说明了调节关节腔内炎性环境的必要性。流式细胞术结果证明了 IL-4促进巨噬细胞向M2型转化,并降低其向M1型炎症表型转化,有助于修复受损的关节软骨。（3）双层微球的体内药效学验证与安全性评价通过在诱导关节炎发生的第4周将共载非甾体抗炎药（PXB）和巨噬细胞极化因子（IL-4）的双层微球注射至大鼠退行性关节腔,治疗6周后,与需要频繁注射给药的大鼠相比,制剂组大鼠关节间隙宽度有增加的趋势,且关节表面更加光滑完整,未见明显骨赘产生,分离出骨小梁发现密度亦增加,在治疗12周后关节表面光滑骨小梁密度接近假手术侧。组织病理学结果显示载药微球有效减轻了滑膜炎症。免疫组化与定量结果表明微球制剂显着增强了对M2型巨噬细胞的标志性分子胶原蛋白2（COL2）、糖胺聚糖（Aggrecan）、白介素-10（IL-10）表达的促进作用,这些是软骨修复的关键因子。