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中药注射剂在临床上广泛应用，但其安全、合理性等问题备受关注。开展药代动力学研究，揭示药物在体内的过程，对于指导临床安全合理用药有重要意义。但中药注射剂成分复杂，其发挥药效的物质基础多不明确，单一或者几个成分的药动学行为特征能否表征中药的整体体内过程有待探讨和论证。灯盏细辛注射液为菊科植物短亭飞蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz的干燥全草经提取制成的灭菌水溶液，临床主要用于心脑血管疾病，如冠心病、心绞痛、急性脑梗塞等的治疗。当前，灯盏细辛注射液的抗心肌缺血药效物质基础研究报道不多，其多成分的体内过程研究有待深入。本文以灯盏细辛注射液为研究对象，在其物质基础明晰的基础上，研究其主要成分的体内抗心肌缺血活性，找出主要药效成分，进一步以主要药效成分为指标，探索多成分的药代动力学研究方法。通过上述研究，以期揭示灯盏细辛注射液的抗心肌缺血药效物质基础及其在大鼠体内的整体药动学行为特征，为中药多成分的药代动力学研究提供新的方法学参考。
具体研究内容及结果如下：
1.采用LC-ESI-MS/MS对灯盏细辛注射液化学成分的裂解规律进行推导，并结合LC-Q-TOF-MS测定的精确分子量信息，从灯盏细辛注射液中鉴定出15个成分。
2.首次采用LC-ESI-MS/MS建立灯盏细辛注射液中13个主要成分的含量测定方法，并用于灯盏细辛注射液的定量分析。色谱柱为Ultimate?XB-C18(4.6×100mm,3.5μm)，0.7mL/min的流速，MRM负离子模式下检测，13个化合物在24min内全部检出。该方法简便、快速，用于5个批次灯盏细辛注射液的含量测定研究，结果显示，灯盏乙素在各批次注射液中含量最高(410.93±61.74μg/mL)；4,5-二咖啡酰奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量次之(225.70±71.15μg/mL、157.97±67.18μg/mL)。上述研究为后续研究提供了含量信息。
3.建立异丙肾上腺素致心肌缺血小鼠模型，研究灯盏细辛注射液中5-咖啡酰基奎宁酸、4-咖啡酰基奎宁酸、3-咖啡酰基奎宁酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、灯盏乙素、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸10个主要成分的体内抗心肌缺血药效作用。结果显示，灯盏乙素、3-咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸四个成分(剂量均为30mg/kg)能显著降低小鼠心电图ST段抬高值及能明显降低模型小鼠的血清CK水平(vs.模型组，P<0.05)，并能减轻模型小鼠心肌组织病理性损伤。上述研究表明，灯盏乙素、3-咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸四种成分是灯盏细辛注射液发挥抗心肌缺血作用的主要药效成分。
4.首次采用LC-ESI-MS/MS建立大鼠血浆中灯盏细辛注射液13个成分的含量测定方法，并用于灯盏细辛注射液在大鼠体内的药动学研究。大鼠单剂量尾静脉注射给予低(7.2mL/kg，给药前体积浓缩10倍)、高(36mL/kg，给药前体积浓缩10倍)剂量的灯盏细辛注射液，检测13个成分的血药浓度，计算药动学参数。结果显示，两种剂量下13个成分的t1/2相差不大，但AUC随剂量增加而增大。灯盏乙素、飞蓬酯乙、3,4-diCDOA或(4,9-diCDOA)在大鼠体内消除相对较慢(t1/2>1h)，其余10个成分在大鼠体内消除迅速(t1/2<1h)。4-CDOA、灯盏乙素、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙、3,4-diCDOA(或4,9-diCDOA)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和4,5-二咖啡酰奎宁酸8个成分的AUC相对较大(低剂量AUC0-∞为215.61-2275.72h·ng/mL，高剂量AUC0-∞为1422.05-7484.27h·ng/mL)。综合考虑各成分的含量大小、药效作用及药动学特征，择取了灯盏乙素、3-咖啡酰基奎宁酸、飞蓬酯乙、3,4-diCDOA(或4,9-diCDOA)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和4,5-二咖啡酰奎宁酸6个成分作为药代标志物来表征灯盏细辛注射液在体内的药动学行为特征；此外，还采用血药浓度加和法和AUC权重整合法对药代标志物进行了整合药动学研究。
具体研究内容及结果如下：
1.采用LC-ESI-MS/MS对灯盏细辛注射液化学成分的裂解规律进行推导，并结合LC-Q-TOF-MS测定的精确分子量信息，从灯盏细辛注射液中鉴定出15个成分。
2.首次采用LC-ESI-MS/MS建立灯盏细辛注射液中13个主要成分的含量测定方法，并用于灯盏细辛注射液的定量分析。色谱柱为Ultimate?XB-C18(4.6×100mm,3.5μm)，0.7mL/min的流速，MRM负离子模式下检测，13个化合物在24min内全部检出。该方法简便、快速，用于5个批次灯盏细辛注射液的含量测定研究，结果显示，灯盏乙素在各批次注射液中含量最高(410.93±61.74μg/mL)；4,5-二咖啡酰奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量次之(225.70±71.15μg/mL、157.97±67.18μg/mL)。上述研究为后续研究提供了含量信息。
3.建立异丙肾上腺素致心肌缺血小鼠模型，研究灯盏细辛注射液中5-咖啡酰基奎宁酸、4-咖啡酰基奎宁酸、3-咖啡酰基奎宁酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、灯盏乙素、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸10个主要成分的体内抗心肌缺血药效作用。结果显示，灯盏乙素、3-咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸四个成分(剂量均为30mg/kg)能显著降低小鼠心电图ST段抬高值及能明显降低模型小鼠的血清CK水平(vs.模型组，P<0.05)，并能减轻模型小鼠心肌组织病理性损伤。上述研究表明，灯盏乙素、3-咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸四种成分是灯盏细辛注射液发挥抗心肌缺血作用的主要药效成分。
4.首次采用LC-ESI-MS/MS建立大鼠血浆中灯盏细辛注射液13个成分的含量测定方法，并用于灯盏细辛注射液在大鼠体内的药动学研究。大鼠单剂量尾静脉注射给予低(7.2mL/kg，给药前体积浓缩10倍)、高(36mL/kg，给药前体积浓缩10倍)剂量的灯盏细辛注射液，检测13个成分的血药浓度，计算药动学参数。结果显示，两种剂量下13个成分的t1/2相差不大，但AUC随剂量增加而增大。灯盏乙素、飞蓬酯乙、3,4-diCDOA或(4,9-diCDOA)在大鼠体内消除相对较慢(t1/2>1h)，其余10个成分在大鼠体内消除迅速(t1/2<1h)。4-CDOA、灯盏乙素、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙、3,4-diCDOA(或4,9-diCDOA)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和4,5-二咖啡酰奎宁酸8个成分的AUC相对较大(低剂量AUC0-∞为215.61-2275.72h·ng/mL，高剂量AUC0-∞为1422.05-7484.27h·ng/mL)。综合考虑各成分的含量大小、药效作用及药动学特征，择取了灯盏乙素、3-咖啡酰基奎宁酸、飞蓬酯乙、3,4-diCDOA(或4,9-diCDOA)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和4,5-二咖啡酰奎宁酸6个成分作为药代标志物来表征灯盏细辛注射液在体内的药动学行为特征；此外，还采用血药浓度加和法和AUC权重整合法对药代标志物进行了整合药动学研究。