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喉癌是头颈部较为常见的恶性肿瘤之一,但在其综合治疗中,化疗的疗效欠佳,其主要原因是由于多药耐药性的产生。因此研究喉癌多药耐药相关基因的表达和调控机制以及筛选具有高效、低毒及多靶点性的中药逆转剂,对于提高喉癌的疗效,尤其是远期疗效,有重要的意义。本文以长春新碱为诱导剂,采用药物浓度梯度递增法体外诱导建立了喉癌多药耐药Hep-2/v细胞模型。在此基础上应用基因芯片技术研究喉癌耐药细胞株Hep-2/v与其亲本细胞Hep-2之间的多药耐药相关miRNA及mRNA表达谱,筛选出差异表达的miRNA及mRNA,并利用Target数据库初步预测了miRNA的靶基因。MTT、流式细胞术及RT-PCR、Western Blot等技术研究中药对喉癌细胞的逆转特性及多药耐药相关基因mRNA的表达变化。统计学方法对实验结果进行了分析。实验结果如下:(1)以药物浓度梯度递增法成功构建了喉癌多药耐药细胞模型。(2)AFFX miRNA芯片筛查出差异表达的多药耐药相关miRNA共7个,其中表达上调2个,表达下调5个。(3)全基因组寡核酸微阵列芯片筛查出差异表达的多药耐药相关基因共有605个,其中表达上调的基因270个,表达水平下调的基因335个。(4)结合基因芯片筛查结果,初步预测miRNA-210的靶基因为HTRA1及NUPR1;miRNA-923的靶基因为NUPR1;miRNA-93的靶基因为RGS10。(5)粉防己碱及川芎嗪对Hep-2/v细胞的逆转倍数分别为2.22倍和1.88倍。RT-PCR及Western Blot检测显示粉防己碱能够逆转Hep-2/v细胞内HTRA1、RGS10及MDR1基因的表达,但对NUPR1基因的表达无逆转作用。本实验对喉癌多药耐药相关基因的表达及调控机制进行了研究,表明miRNA可通过调控其靶基因的表达参与喉癌的多药耐药性。同时对中药的逆转机制进行了研究,并筛选出对喉癌耐药细胞有明显逆转作用的中药逆转剂,为进一步研究奠定了基础。