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小类泛素修饰肽(small ubiquitin-related modifier,SUMO)参与的蛋白质的SUMO化修饰是一种翻译后修饰形式,具有重要的生物学功能。该过程是可逆的,SUMO化与去SUMO化之间的平衡受环境胁迫而改变,其中病毒-宿主的相互作用是改变细胞SUMO化修饰的重要因素。有些病毒能影响宿主蛋白的SUMO化修饰,参与到依赖SUMO化修饰的信号通路的调节过程,有些病毒蛋白能盗用宿主的SUMO系统来修饰自身,从而创造有利于病毒复制的细胞环境。正是基于此,本文通过获取病毒在感染过程中对宿主SUMO系统影响的相关信息,为研究病毒与宿主之间的相互关系和拓展抗病毒治疗方案提供了新的视野。 本文的具体工作包括真核表达质粒SUMO2和SUMO4的构建;分别采用五联病毒疫苗(犬狂犬病、犬瘟热、细小病毒性肠炎、犬副流感和传热性肝炎病毒)、狂犬病毒灭活疫苗、伪狂犬病毒疫苗、猪瘟病毒疫苗、新城疫病毒(NDV)疫苗、poly I∶C、干扰素(IFN)刺激293T细胞,刺激时长分别为1h、4h、8h和24 h;用不同浓度的五联病毒疫苗和狂犬病毒灭活疫苗分别刺激293T细胞;用狂犬病毒灭活疫苗和NDV疫苗刺激转染真核质粒的293T细胞。收集细胞后通过免疫印迹实验,分别选择用Anti-SUMO,Anti-AOS1,Anti-UBA2和Anti-UBC9抗体进行检测,比较细胞整体的SUMO化修饰及其相关酶所发生的变化。 免疫印迹结果显示:五联病毒疫苗和狂犬病毒灭活疫苗刺激后,整体SUMO化修饰发生显著的变化,表现为游离型SUMO减少,SUMO化修饰蛋白增多,同时SUMO化修饰酶也呈现出有规律的变化。另外利用较高浓度的五联和狂犬灭活病毒刺激细胞时,相比于低浓度病毒,其影响效应更为明显;NDV刺激后,SUMO化修饰并没有发生明显的变化,且相关酶也没有发生显著的变化,其对宿主SUMO化修饰的影响体现在病毒刺激24 h后,能检测到一条50 kD大小的特异性条带;而伪狂犬病毒疫苗、猪瘟病毒疫苗、poly I∶C,IFN刺激对SUMO化修饰没有影响。 另外,本文还检测到重组SUMO在狂犬病毒灭活疫苗刺激下也能参与到SUMO化修饰中。本研究为今后继续研究病毒和SUMO修饰的关系积累了数据。