目的:CA药是一种链霉菌株发酵产物中分离出来的大环内酯类抗生素,是一种新型的强效免疫抑制剂。动物实验与临床应用研究发现,CA药的免疫抑制作用比环孢霉素A(CSA)高10~100倍,而毒副反应与环孢霉素A比较发生率低,程度也轻。根据CA药的处方前研究,CA药在水中几乎不溶,口服生物利用度低,限制了其在临床的广泛应用。本实验拟将其制成缓释固体分散体,再进一步制成胶囊,既提高CA药在水中的溶解度及生物利用度,又降低药物的释放速度,减少服药次数,稳定血药浓度,降低毒副作用,为广泛的临床应用奠定了基础。方法:1 CA药固体分散体缓释胶囊的制备:在参阅文献和预实验的基础上,确定了CA药固体分散体缓释胶囊的制备方法。CA药缓释固体分散体的制备以释放度和稳定性为指标,对三个处方因素、四个工艺因素进行了单因素考察,确定了搅拌速度、溶剂挥发程度、干燥温度、整粒过筛目数四个工艺因素的具体条件,然后在单因素考察的基础上,以药物与载体的比例为考察因素,以释放度为指标,设计三因素三水平的正交实验,对处方进行优化,对评分结果进行极差分析,确立了CA药固体分散体缓释胶囊的最佳处方。按最优处方,制备三批CA药固体分散体缓释胶囊,测定药物的释放度,考察制备工艺的稳定性。2 CA药固体分散体缓释胶囊的质量评价:采用差示扫描量热法(DSC)、X-射线衍射法(X-Ray)验证固体分散体的形成。采用高效液相色谱(HPLC)法测定CA药的含量和有关物质等。释放度方法采用中国药典2005版二部附录XD(释放度测定法)第一法(小杯桨法),考察CA药的释放度,将释放度数据分别用Higuchi模型、零级方程和一级方程进行拟合,并与国外对照药进行对比。采用中国药典2005版二部附录XE(含量均匀度检查法),考察CA药的含量均匀度。将最优处方的CA药固体分散体缓释胶囊进行影响因素实验,考察高温、高湿和强光对CA药固体分散体稳定性的影响,从而确定胶囊的外包装材料及储存环境。对CA药缓释胶囊进行6个月加速实验,对CA药缓释胶囊的稳定性进行考察。4 CA药固体分散体缓释胶囊的药物动力学实验:以家犬为实验动物,以国外生产的CA药固体分散体缓释胶囊为对照品,采用两制剂、两周期双交叉自身对照设计,对自制的CA药固体分散体胶囊进行药代动力学研究,并与国外对照品进行了生物等效性评价。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定CA药的血药浓度,采用3p87程序计算药物动力学参数,计算相对生物利用度,经方差分析及双单侧t检验评价CA药固体分散体缓释胶囊与国外对照品的生物等效性。结果:1 CA药缓释固体分散体的制备:处方: CA药1.0g乙基纤维素(EC 10cp) 0.4g羟丙甲纤维素(HPMC2910) 0.3g乳糖4.0g采用溶剂法,将处方量的CA药粉末、乙基纤维素(EC 10cp)溶于无水乙醇中,搅拌混匀,按处方量加入羟丙甲基纤维素(HPMC2910),搅拌使呈黏性胶体溶液,加入乳糖,室温下,不断搅拌挥发溶剂至半固体状态,40℃真空减压干燥36小时,制成固体分散体,将制备的固体分散体干品粉碎过筛,选取80 ~100目备用。2 CA药固体分散体缓释胶囊的制备制备规格为1mg/120mg的胶囊:取制备的固体分散体与润滑剂硬脂酸镁(0.06%W/W)、助流剂微粉硅胶(0.10%W/W)、填充剂直压乳糖按等量递加法均匀混合,灌装于胶囊壳中。3 CA药固体分散体缓释胶囊的稳定性实验:3 CA药固体分散体缓释胶囊的质量评价:3.1固体分散体的验证:通过DSC及X-Ray,证明了CA药以非晶态分散于载体中,形成了固体分散体3.2 CA药固体分散体缓释胶囊的检测:按最优处方和工艺制备的三批CA药固体分散体胶囊,HPLC测定含量结果为:三批CA药胶囊的含量分别为标示量的102.8%、102.6%、99.7%,均在限定的90～110%的范围内。3.3 CA药固体分散体缓释胶囊释放度的检测:采用相似因子法,对自制药与对照药释放曲线进行对比,f2值为91.80,在50≤f2≤100范围内,说明自制CA药固体分散体缓释胶囊与市售CA药胶囊释放曲线相似。4 CA药固体分散体缓释胶囊的稳定性实验:CA药固体分散体缓释胶囊在高温、高湿条件下,性状没有变化,释放度和含量下降明显,故CA药固体分散体缓释胶囊对高温、高湿均比较敏感,需防潮的包装材料。在强光照射条件下,性状、含量及释放度均无显著性差异,表明CA药固体分散体缓释胶囊对光稳定。加速实验在CA药放置1月、2月、3月、6月后分别取样检测,各指标无显著变化,表明CA药固体分散体胶囊在加速六个月实验条件下稳定。5 CA药固体分散体缓释胶囊的药物动力学实验:采用3p87程序对自制CA药胶囊与国外对照药的血药浓度数据进行处理,依AIC法判断其药时曲线符合两室模型,自制CA药胶囊的相对生物利用度分别为108.67%±12.87%和113.8 %±10.8%,经方差分析及双单侧t检验,自制生产的CA药胶囊的AUC(0-t)和AUC(0～∞)的90%可信限分别为94.6%~112.2 %和91.4%~121.4%,均落在国外对照品的80%～125%范围内;Cmax的90%可信限为99.8%~130.8%,在国外对照品Cmax的70%～143%范围内;Tmax经非参数检验与国外对照品无显著性差异。因此,自制生产的CA药胶囊与国外生产的CA药胶囊生物等效。结论:以上各项实验证明:CA药制备成固体分散体缓释胶囊,能够大大增加原料药溶解度及生物利用度,降低药物的释放度,与国外对照品达到生物等效,从而保证了在临床应用的疗效。制备该药物的固体分散体所采用的制备方法适合工业大生产,稳定性良好,具有广阔的应用前景。