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本研究主要内容如下：
1、OK—432刺激人单核细胞来源的树突状细胞成熟与p38及NF—KB信号通路相关研究。
OK—432是一种链球菌提取物，已被证实可作为刺激人单核细胞来源的树突状细胞（MoDC）成熟的有效激活剂。OK432刺激DC细胞成熟主要是通过激活TLR4来进行，然而，其具体的信号转导机制目前还不完全清楚。在本研究中，我们研究了OK—432刺激人单核细胞来源DC细胞成熟的相关分子机制。我们发现当OK—432作用于未成熟的DC细胞（iDC）时，p38 MAPK及NF—kB信号通路被激活，同时伴随着DC细胞表面成熟分子CD80，CD83，CD86及HLA—DR（MHCⅡ）的上调表达，TNF—a、IL—12以及IP—10等细胞因子的分泌量增加。同时，DC细胞刺激自体T淋巴细胞增殖的能力也得到增强。OK—432刺激MoDC成熟能够被p38信号通路特异性抑制剂SB203580或是NF—κB信号通路的抑制剂BAY—117082抑制。而JNK信号通路抑制剂SP600125及ERK信号通路特异性抑制剂PD98059对OK—432刺激MoDC细胞的成熟则没有显著影响。因此，我们的结果表明OK—432刺激MoDC细胞成熟足由于，至少是部分通过p38及NF—kB信号通路的激活来进行。
2、负载肝癌细胞总RNA的DC细胞能诱导更强的抗肝癌免疫应答。
以肿瘤细胞全抗原负载DC细胞可以诱导多克隆的CTL产生，而无需鉴定具体的肿瘤相关抗原。然而，不同的肿瘤细胞全抗原负载DC细胞对诱导CTL产生的效果可能有所不同，相关内容在肝癌DC疫苗制备的研究上还少见报道。在本研究中，我们对肝癌细胞总RNA及裂解物作为全抗原对DC细胞诱导CTL产生的影响。结果发现，4株肝癌细胞系，HepG2、Hep3B、Huh7及SMMC—7721总RNA负载DC比裂解物负载DC均能诱导更强的CTL效应。此外，内细胞因子流式细胞分析表明，总RNA负载的DC细胞诱导增殖的T淋巴细胞，CD4+及CD8+细胞均分泌更高的IFN—γ，而IL—4的分泌与裂解物负载的DC细胞诱导增殖的T淋巴细胞差别不大，表明总RNA负载更有利于DC刺激Th1型T淋巴细胞及CTL杀伤性T淋巴细胞产生。总RNA负载与裂解物负载均不会显著影响DC细胞的成熟表型，但裂解物负载会大大降低DC细胞IL—12p70、IFN—γ、IP—10等细胞因子的分泌，同时增加免疫抑制因子IL—10的分泌。总RNA负载与裂解物负载的DC细胞诱导自体T淋巴细胞增殖上没有显著区别，但总RNA负载的DC细胞增殖的T淋巴细胞CD8+/CD4+T的值更高。总体结果表明了对于肝癌细胞DC疫苗的制备，肿瘤细胞总RNA负载可能是一种更好的选择方式，有利于激发更强的CTL效应。
3、SOCS1基因沉默可增强DC细胞抗肝癌免疫应答。
SOCS1是免疫反应系统中一种重要的负调控因子，对调节DC细胞的免疫功能起关键作用。我们在本研究中，采用特异性的siRNA沉默DC细胞中SOCS1的表达，探讨SOCS1基因沉默的DC细胞在增强抗肝癌免疫应答上的作用及机制。结果表明，SOCS1基因沉默的DC细胞诱导增殖的T淋巴细胞对肝癌靶细胞具有更高的杀伤活性。内细胞因子分析结果也表明SOCS1基因沉默的DC细胞诱导增殖的CD4+及CD8+的T淋巴细胞均分泌更高含量的IFN—γ，而分泌IL—4的水平则与对照组差别不大，表明SOCS1基因沉默的DC细胞可有效地诱导Th1型及CTL型T淋巴细胞产生。SOCS1基因沉默的DC细胞内吞能力有所增强，其表面成熟分子CD40、CD80、CD83、CD86、HLA—A，B，C及HLA—DR的表达则变化不大，但可分泌更高浓度的IFN—γ。SOCS1基因沉默的DC细胞诱导T淋巴细胞增殖上与对照组区别不大，同时其诱导增殖的T淋巴细胞亚群上也与对照组没有显著区别。SOCS1基因沉默的DC细胞，OK432刺激后其信号分子STAT1、IκB—α的磷酸化水平有所提高，表明SOCS1基因沉默的DC细胞，其免疫功能的增强是通过JAK/STAT、NF—κB信号通路的增强激活来进行的。我们的总体结果表明SOCS1基因沉默的DC细胞可更高效地诱导抗肝癌免疫应答。