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【目的】
探讨P物质对大鼠三叉神经节(TG)神经元膜H’.门控电流的调制作用及其机制。
【方法】
急性分离TG神经元,通过排管快速换液装置行胞外给药,电极内灌药行胞内透析后,采用全细胞膜片钳技术记录神经元膜H门控电流。
【结果】
1.依照我们在背根神经节(DRG)神经元分类的方式,将TG神经元H+.门控电流也分为四型:
①T-型(2.5%,10/405);
②S-型(41.5%,168/405);
③B-型(29.9%,121/405);
④O-型(23.2%,94/405);
2.哺乳动物体内可调制酸敏感离子通道(ASICs)的功能的肽类物质目前报道的仅有NPFF和NPSF。本文主要研究另一重要肽类物质——SP是否对ASICs具有调制作用。实验结果证明:
①共加SP(10<-11>~10<-6>M)和H<+>(pH 5.5~4.0)能浓度依赖性增强S-型H<+>-门控电流(67.5%,27/40)。当SP浓度在10<-9>~10<-7>M范围,H<+>-门控电流增加达60%~80%,EC<50>值为10<-8>M左右。但这种增强作用不能被SP受体拮抗剂GR82334所阻断(n=3);
②共加SP(10<-7>M)和H<+>对于B-型H<+>-门控电流,无论短暂还是持续成分均有增强作用,特别是前者(增加达67.46±8.83%,n=27,P<0.01)更为明显。GR82334(3.6×10<-6>M)能阻断SP对短暂成分的增强效应(n=10,P<0.01);
③预加SP(10<-7>M)1分钟对B-型H<+>-门控电流起到不是增强而是抑制作用,其中对短暂成分的抑制可达49.9±4.31%(n=22,P<0.01)。GR82334(3.6×10<-6>M)不能阻断此抑制作用(n=7,P>0.05);
④应用胞内透析GDP-β-S(5x10<4>M)13~16min后,能翻转SP增强B-型H<+>门控电流的效应(n=6,P<0.01)。
【结论】
1. TG神经元H<+>-门控电流可分为四型:T-型、S-型、B-型和O-型。
2.共加SP和H<+>能浓度依赖性增强S-型H<+>-门控电流,SP受体拮抗剂GR82334不能阻断此作用。
3.共加SP和H<+>能增强B-型H<+>-门控电流,GR82334和胞内透析GDP-β-S能阻断SP对B-型H<+>-门控电流的增强作用。SP的这一增强作用可能是SP通过作用于胞膜上与ASICs共存的NK1受体,经G蛋白偶联和胞内转导机制所致。
4.预加SP抑制B-型H<+>-门控电流,并以短暂成分尤为明显,此抑制效应不能被GR82334阻断。