Ago2在肝癌发生发展中功能和机制的研究

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目的:本实验室前期通过大规模基因芯片筛选,发现Ago2在肝癌中表达上调。本课题主要研究Ago2基因的生物学功能以及与肝癌发生发展的关系。  方法:构建Ago2基因的真核表达载体,采用荧光定量PCR技术分析Ago2基因在肝癌等肿瘤组织中的表达水平;观察Ago2的过表达以及Knock-down对肝癌细胞的生长、克隆形成能力以及软琼脂克隆形成能力的影响;采用细胞划痕、transwell技术观察Ago2对肝癌细胞迁移能力的影响;观察Ago2的过表达以及Knock-down在裸鼠中对肿瘤生长、转移的影响;定量PCR和免疫印迹检测了Ago2对相关基因表达的影响;通过染色质免疫共沉淀技术分析Ago2影响的蛋白FAK。  结果:荧光定量PCR的结果显示Ago2基因在63.8%的肝癌样本中表达上调1.5倍以上。体外实验我们发现,Ago2的过表达可以促进Huh7、HepG2、SK等肝癌细胞的生长、软琼脂克隆形成,在SK-hep-1和Hep3B细胞中,能促进迁移能力;另一方面,Ago2的表达下调可以抑制WRL-68、YY-8103和PLC/PRF/5等肝癌细胞的软琼脂克隆形成及体外迁移能力;通过体内实验,我们发现,过表达Ago2可促进裸鼠皮下成瘤,促进肿瘤的尾静脉转移以及脾脏转移;Ago2表达下调后,同样观察到肿瘤的脾脏转移受到明显抑制;通过实验证明,Ago2在蛋白质和RNA水平都能影响FAK的表达,染色质免疫共沉淀证明,Ago2可结合在FAK启动子上游,起到一个转录调控的作用。  结论:Ago2的表达上调在肝癌发生发展的过程中具有重要作用,能够促进肝癌细胞的迁移;Ago2对肝癌细胞的影响通过FAK起作用;Ago2直接影响FAK的表达。
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