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精液冷冻保存技术的发展使得优质种公畜的遗传资源得以在广大的范围内流动,大大提高了畜牧业遗传品质的改良速度。近年来,人工授精技术已在全牛的养牛业中广泛使用,已产生相当成熟的产业链,而人工授精技术在猪的生产上尚未形成规模化应用。其主要原因是猪精子对低温刺激以及冷冻的极端敏感,容易由于温度骤变以及冷冻产生不可逆的损伤,因此对猪精液冷冻保护剂和冷冻流程研发造成了很多困难。猪精子在冷冻冻融后,其精子活力和活率会出现明显的下降,精子质膜、线粒体膜以及顶体的完整性会遭到很大程度的破坏,这些损伤使得经过冷冻保存的猪精液的精子质量以及授精能力严重下降,以至于无法满足人工授精的需求,因而成为了猪的人工授精的技术瓶颈,阻碍了其在畜牧业中的应用和推广。为了提高猪精液在冷冻保存后的品质,本研究采用在冷冻稀释液中分别添加不同浓度的右旋糖苷、卡拉胶和羧甲基壳聚糖,通过检测经过冷冻保存后的猪精子的活力和活率、精子膜类结构的完整性水平以及脂质过氧化物MDA水平和超氧化物歧化酶SOD的活性,得到了以下结果:1在冷冻稀释液中添加的右旋糖酐能够显著提高猪精子在冻融后的质量(P<0.05)。其中,当右旋糖酐的添加量在0.8mg/mL时对猪精子有着最好的保护效果,其精子活力、精子活率分别达到了57.7%和52.3%,其质膜完整性、线粒体膜完整性以及顶体完整性分别达到了56.7%、38.3%和60.0%。同时,通过在冷冻稀释液中添加右旋糖酐,还在一定程度上缓解了精子受到的氧化损伤。猪精子冷冻后的MDA水平和SOD水平随着右旋糖酐的添加量的提高逐渐下降和提升,分别在0.8mg/mL和1.0mg/mL时到达了1.93nmol/mg蛋白和107.1 U/mg蛋白。2.卡拉胶作为冷冻保护剂,显著提升了经过冷冻保存的猪精子的各项生理指标(P<0.05),其最适宜添加量为0.8mg/mL。此时猪精子冷冻后的活力、活率,以及顶体完整性、线粒体膜完整性、质膜完整性分别达到了55.0%、50.3%、53.7%、40.7%和60.3%,显著高于对照组(P<0.05)。尤其值得注意的是,卡拉胶在猪精液的冷冻保存中展现出了较强的抗氧化性,随着卡拉胶添加量的上升,精子冻后的脂质过氧化物MDA水平持续下降,SOD水平稳步上升,并在0.8mg/mL和1.0 mg/mL时分别达到MDA的最低值1.79 nmol/mg蛋白以及SOD活性的最大值122.8 U/mg蛋白。3.添加在冷冻稀释液中的羧甲基壳聚糖在精液冷冻的过程中起到了保护了猪精子的作用,且其最适宜添加量为0.6mg/mL。此时猪精子的冻后活力及活率分别为54.0%和52.1%,同时,羧甲基壳聚糖对精子膜结构表现出了显著的保护作用(P<0.05),其线粒体膜完整性、精子质膜完整性和顶体完整性分别为40.5%、52.2%和59.1%。在本研究中,羧甲基的聚糖的抗氧化性为三种多糖中最强的,其添加量在在0.8mg/mL时,精液中MDA水平达到最低值1.44nmol/mg蛋白,而SOD活性在0.6mg/mL时达到最大值116.9U/mg蛋白。以上试验结果表明,添加在冷冻稀释液中的右旋糖酐、卡拉胶和羧甲基壳聚糖能够在猪精液冷冻保存过程中有效保护精子的膜结构,提升冷冻保存的猪精子的品质,并降低其受到的氧化损伤。其中右旋糖酐、卡拉胶与羧甲基壳聚糖的最适宜添加量分别为0.8mg/mL、0.8mg/mL和0.6mg/mL。