重组猪干扰素α抗猪传染性胃肠炎病毒的研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Jeanneyli
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干扰素具有广谱的抗病毒和免疫调节活性,在机体抵抗外源病毒性病原的感染中发挥着重要作用。目前己有天然干扰素、原核或真核表达的重组干扰素应用于临床上病毒性疾病的治疗。猪重组干扰素使用大肠杆菌进行可溶性表达,所表达的干扰素具有广谱的抗病毒活性,在多种动物源性的细胞上显示出良好的抗病毒能力。本实验分别使用细胞和动物感染模型测试重组干扰素对猪传染性胃肠炎的疗效,取得了以下进展:1将实验室保存的TGEV SC-T株进行鉴定,然后使用纯净的TGEV SC-T株感染PK15细胞作为细胞感染模型测试重组干扰素对TGEV的抑制作用。结果显示效价约2×104IU的干扰素样品经倍比稀释后处理PK15细胞,并使用TGEV感染细胞,发现在32倍稀释时能够完全抑制TGEV所致的细胞病变,与人干扰素标准品显示出一致的抗病毒能力。通过嗜斑实验发现重组干扰素在32倍稀释时能够完全抑制TGEV病毒嗜斑的形成,在64倍稀释时能够显著抑制TGEV病毒嗜斑的形成。另外使用半定量RT-PCR和Wectern-Blot分别检测预处理细胞感染TGEV后病毒核酸和蛋白的表达情况,结果显示重组干扰素能够显著抑制病毒基因组的复制和TGEV特异性蛋白的在细胞中的表达,其效果优于干扰素标准品。2使用不同滴度的TGEV SC-T强毒株感染断奶仔猪,仔猪感染后均表现出典型的TGE疾病症状,使用RT-PCR能够在粪便中检测到TGEV的排毒并能在粪便和组织病料中分离到TGEV病毒,通过病理切片分析发现中剂量和高剂量感染组肠道均出现特征性的病理变化,由此表明使用SC-T株成功构建了TGEV的动物感染模型。在此基础上使用TGEV SC-T株感染断奶仔猪,然后分别使用不同剂量的重组干扰素进行治疗,结果表明使用2×104和2×105IU连续三天注射可以得到80%的治愈率。在不同感染时间进行治疗结果表明在感染TGEV的同时注射干扰素可以获得100%的治愈率而在感染后24h小时治愈率为80%,随着感染时间的增加治愈率显著下降。三个批次的干扰素治疗实验结果均显示所有三个批次干扰素治愈率均在80%以上,显示出良好的抗病毒能力。通过以上研究表明,重组干扰素在体外和体内均显示出良好的抗病毒能力。使用重组干扰素在病毒感染早期进行治疗可以显著降低感染猪死亡率,具有良好的临床应用前景。
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