利用糖基化转移酶对染料木素糖基化的研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yuyugugu
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大豆异黄酮具有良好的类雌激素作用,同时也是一种天然的癌症预防剂。染料木甙是大豆异黄酮中的一种,与其他种类的大豆异黄酮相比,染料木甙的雌激素活性相对最高,其预防妇女更年期综合症以及抗癌作用的效果也最好。但是市售的大豆异黄酮成分较杂,导致其功能效果不明显。本研究运用生物转化法,利用糖基化转移酶将染料木素一步转化为染料木甙。从豆芽和蜡状芽孢杆菌ATCC10987的基因组中分别克隆糖基化转移酶GmIF7GT和BcGT-1的基因,选用枯草芽孢杆菌载体pHT43和大肠杆菌载体pETDuet-1和pMAL-c2X,分别构建基因工程菌,在两种表达系统中分别进行了诱导表达的研究。主要工作如下:1、成功构建枯草芽孢杆菌pHT43-GmIF7GT/WB600和pHT43-BcGT-1/WB600并进行诱导表达,经SDS-PAGE验证,两株基因工程菌均无目的蛋白大小的条带。取粗酶液进行反应,经HPLC和LC-MS分析,反应体系中均无目的产物的产生。分析原因为选用的宿主菌WB600自身分泌的蛋白酶将两种糖基化转移酶GmIF7GT和BcGT-1降解,故构建的基因工程菌表达的外源蛋白不能进行催化。2、成功构建大肠杆菌pETDuet-1-BcGT-1/BL21、pMAL-c2X-BcGT-1/BL21、 pETDuet-1-GmIF7GT/BL21和pMAL-c2X-GmIF7GT/BL21并进行诱导表达,经过验证,四株基因工程菌诱导表达的外源蛋白均具有催化活性,经与底物染料木素反应能够产生染料木甙,分别测定了酶活与底物转化率。最终实现了染料木甙的生物法转化。
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