多聚左旋赖氨酸促进软骨形成的实验研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liqiang20010
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目的:探讨多聚左旋赖氨酸(poly-L-lysine,PL)对软骨形成的促进作用及其可能机制。 方法:取大鼠肢芽细胞在含不同剂量PL(0-15μg/ml)的培养液中培养四天,根据培养细胞所形成的软骨集落数量、与阿尔新蓝结合量和Ⅱ型胶原的表达情况来观察分析PL促进软骨形成现象。根据不同时间添加PL来推断添加PL的最佳时间。采用免疫组化方法检测神经钙粘附蛋白的表达和通过直接在培养液中添加神经钙粘附蛋白抗体后观察软骨形成情况的现象来探讨PL促进软骨形成的机制。 结果:在添加PL剂量组中,PL以剂量依赖性方式促进培养细胞中软骨集落的形成,形成的软骨集落数量如下:59±13(0μg/ml);82±14(1μg/ml);97±19(3μg/ml);108±24(5μg/ml);当PL浓度为10μg/ml时,软骨细胞集落互相连接成片状,以至未能彼此区分;PL浓度增至15μg/ml时,软骨细胞集落形成减少,且不典型。因此,添加PL的最佳剂量可能为10μg/ml。在添加PL(5μg/ml)时间组中,软骨集落数量如下:108±24(0-12小时);105±20(12-24小时);86±15(24-36小时);73±15(36-48小时);62±12(48-60小时);57±15(60-72小时)。结果表明,添加PL的最佳时间为培养的第24小时内。免疫组化实验结果显示:高剂量PL组(5μg/ml)中Ⅱ型胶原(培养第四天) 汕头大学医学院硕士研究生论文和神经钙粘附蛋白(培养第一、=大及四天)的表达较对照组u u g加l)增强。在多聚赖氨酸与神经钙粘附蛋白关系组中,结果如下:37土8(空白)、23士6(抗体)、59士8(PL)、31 t6(PL+抗体),说明神经钙粘附蛋自抗体对软骨形成有抑制作用,也抑制PL的作用。结论:PL在一定浓度范围内以剂量依赖性方式促进软骨的形成,且其作用机制与神经钙粘附蛋白表达增强有密切关系。
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