背景与目的:目前来看肺癌仍是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。调查数据显示肺癌约占男性癌症死亡率的28%及女性的26%,均居癌症相关死亡率的首位。肺癌中又以非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)最为多见,约占肺癌总数的85%。虽然近年来靶向治疗的发展在一定程度上提高了非小细胞肺癌的治疗效果,但五年生存率仍无明显改善。影响NSCLC预后的最主要因素是复发和转移,研究表明TGF-β在癌症早期能抑制上皮细胞增殖起着抑癌作用,而在晚期则促进肿瘤生长和转移;体内TGF-β含量较高的患者预后较差。因此对NSCLC侵袭、转移机制的研究已成为当前国内外研究的热点。MicroRNA发挥基因表达调控作用通常是通过与特定的靶基因3’UTR种子序列完全或不完全互补配对来实现基因沉默或降解的。已经有许多研究表明在各种癌症的发生和发展过程中检测到了多种microRNAs表达的改变。我们通过生物信息学网站预测显示多个microRNAs可以靶向ZEB2的3’UTR区域的不同种子序列。本研究旨在探讨NSCLC中ZEB2异常表达的microRNA调控机制,为NSCLC的早期诊断和治疗提供实验依据。方法:(1)生物信息学软件预测分析能够靶向ZEB2的3’UTR区域的microRNAs,我们筛选到miR-367-3p。首先运用双荧光素酶活性检测实验验证miR-367-3p是否与ZEB2 3’UTR区域的种子序列直接结合,验证mi R-367-3p对ZEB2的靶向作用。合成miR-367-3p mimics瞬时转染A549和H226细胞,运用Real-Time PCR和Western Blot方法检测转染前后ZEB2 mRNA和蛋白表达变化。(2)Real-Time PCR方法分别检测在人正常支气管细胞HBE和6株NSCLC细胞以及20例淋巴结转移、20例没有淋巴结转移和60对NSCLC组织样本中miR-367-3p和ZEB2基因的mRNA表达水平。并且将20例淋巴结转移、20例没有淋巴结转移的NSCLC组织中miR-367-3p和ZEB2基因做差异性表达对比分析,将60对NSCLC样本组织中的miR-367-3p和ZEB2基因的表达作回归分析,统计出NSCLC中ZEB2和miR-367-3p表达的相关性。(3)将miR-367-3p的模拟体mimics转染至NSCLC细胞株A549和H226中,在加或不加TGF-β刺激下,运用Western Blot方法检测TGF-β诱导的EMT分子marker:e-cadherin,n-cadherin,vimentin的蛋白表达情况。运用transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力的变化。(4)将si-zeb2转染到nsclc细胞株a549和h226细胞中将zeb2基因干扰,在加或不加tgf-β刺激下,运用westernblot方法检测tgf-β诱导的emt分子marker:e-cadherin,n-cadherin,vimentin的蛋白表达情况。运用transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果:(1)通过生物信息学软件预测和在nsclc细胞中的dualluciferasereporterassay实验可知mir-367-3p可以结合在zeb2基因的3’utr区。nsclc细胞株a549和h226瞬时转染mir-367-3p模拟体mimics,zeb2基因的mrna和蛋白表达都显著下降。因此可证明mir-367-3p下调zeb2基因的mrna和蛋白表达并且这种作用是通过mir-367-3p与zeb2基因的3’utr种子序列直接结合引起的。(2)与正常肺上皮细胞hbe相比nsclc细胞a549、95c、95d、h1299、h226、和ltep-α-2中zeb2mrna高表达,mir-367-3p低表达。相比于20例没有淋巴结转移的nsclc组织,在20例有远端淋巴结转移的nsclc组织中,zeb2基因明显高表达但是mir-367-3p的表达没有体现出差异性表达。在60对nsclc组织样本中,我们通过癌组织比癌旁组织对zeb2和mir-367-3p的表达作回归分析发现nsclc中两者的表达之间是没有明显相关性的。(3)在nsclc细胞a549和h226中瞬转mir-367-3pmimics过表达后,在加或不加tgf-β刺激下,由tgf-β诱导的emt分子marker中,e-cadherin蛋白表达上调、n-cadherin、vimentin蛋白表达下调。并且transwell实验显示mir-367-3pmimics过表达后a549和h226细胞的转移与侵袭能力受到抑制。(4)在nsclc细胞a549和h226中干扰zeb2后,在加或不加tgf-β刺激下,由tgf-β诱导的emt分子marker中,e-cadherin蛋白表达上调、n-cadherin、vimentin蛋白表达下调。并且transwell实验显示干扰zeb2基因后a549和h226细胞的转移与侵袭能力受到抑制。结论:nsclc中mir-367-3p能够直接靶向zeb2的3’utr种子序列而沉默zeb2基因的表达。相比于hbe细胞,nsclc细胞中mir-367-3p低表达而zeb2基因高表达。nsclc患者组织中有淋巴结转移的nsclc组织样本中zeb2基因表达明显高于没有淋巴结转移的nsclc组织样本,但是mir-367-3p没有在两者之间体现差异性表达。进一步验证mir-367-3p和zeb2在nsclc组织中表达的相关性发现两者并没有呈现出负相关性,可能原因第一是由于mir-367-3p的表达量在nsclc组织中太低,还有就是可能其他mirna或lncrna也参与了对zeb2和miR-367-3p的调控作用。但是,miR-367-3p可能是一种抑癌基因,在肺癌的发生于发展中,miR-367-3p参与调节TGF-β诱导的EMT过程中上游转录因子ZEB2的表达,在抑制TGF-β诱导的NSCLC细胞上皮-间质转化过程中发挥重要作用。通过研究mi R-367-3p对ZEB2基因的抑制作用可能会有助于提高我们对NSCLC的致病机制的了解,进而对NSCLC的诊断和治疗提供可靠的理论基础。