研究背景及目的：感染性骨缺损是创伤性慢性骨髓炎，是一种严重的骨组织感染性疾病，通常可导致骨的进行性、炎性破坏，无法控制的炎症破坏是其主要特点，后期还存在对抗生素治疗反应不明感、反复复发等特征。革兰氏阳性金黄色葡萄球菌是导致骨髓炎的最常见致病菌，占全部骨髓炎病例的80%左右,骨感染造成的死亡率达27-30%.万古霉素是目前临床上用于治疗由MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)引起的严重感染疾病的重要药物，是目前国内治疗MRSA感染的首选用药。但是由于其全身用药量较大，对耳肾均有毒性，局部用药半衰期短，反复用药又增加了感染率，无法达到有效的长期控制感染的效果，给临床治疗带来了困难。早在1906年，Ehrlich就提出了靶向给药的设想，随着生物医学的发展，这一设想逐渐成为现实。1980年Klemm首次局部应用庆大霉素/聚甲基丙烯酸酯防治骨及软组织感染获得成功引起了人们的重视。本实验旨在通过复乳-固化法制作万古霉素缓释微球，复合微小颗粒骨一期植骨治疗感染性骨缺损的效果，探讨新的治疗感染性骨缺损的方法，为其应用临床提供实验依据。实验方法：1、载万古霉素PLGA微球的制备取2mgPLGA溶解于20mL二氯甲烷中，搅拌制备成初乳相；取2mL吐温-80，加入40mL蒸馏水中，以700r m-1转速搅拌制得第二初乳相；取1mL浓度为200mg m L-1的万古霉素溶液，加入PLGA溶液中，4000r m-1转速下分散、搅拌，再将该混合液加入初乳相吐温-80混合液中，用高速分散器(XHF-D,宁波新芝生物科技股份有限公司)4000r m-1转速下分散，制成PLGA微球的初始液，室温下持续搅拌4小时静置待有白色沉淀附着烧杯底后，6000r m-1(3-18K，SIGMA公司，德国)速度离心清洗3遍后，-20℃冷冻干燥(Scient2-10N，宁波新芝生物科技股份有限公司)，制得载万古霉素的PLGA微球。分别对其进行形态特征及粒径分布测定，微球中万古霉素的含量测定，含量测定中还包括：载药率和包封率，抗生素溶液稳定性，体外释放，微球中万古霉素活性和MIC测定。2、动物实验取48只家兔，按沈霖造模法造成双侧桡骨中上段慢性骨髓炎模型，将动物随机分为3组，每组16只。1个月后按常规方法将骨髓炎局部作彻底清创，并造成桡骨中上段1cm节段性骨缺损的条件下，A组一期行自体小颗粒骨植入；B组一期行自体微小颗粒骨和万古霉素植入；C组一期行自体微小颗粒骨和万古霉素缓释微球混合植入。分别于术前、术后1天、3天、1周、2周、4周测定各组动物血清C反应蛋白及血沉，并于术后2周、4周、8周、12周每组处死4只兔子行植骨区大体形态，X线及组织学观察并进行评分。结果：1、微球测定结果微球表面光滑、无孔隙，载药率达到(4.40±0.2635)%，包封率达到(48.51±14.827)%，HV-PLGA MSs溶解7天的累积释放率达到43.36%，有相对比较长的释放周期；在体外抑菌试验中，HV-PLGA MSs释放的万古霉素作用效果明显。2、动物实验结果①大体形态观察：其中A组1只家兔术后2周植骨部位出现窦道，流出脓性分泌物；术后4周，A组局部可见植入之颗粒骨被纤维组织覆盖，B、C组局部可见骨痂形成，针刺感较硬；术后8周，A组可见骨痂形成填满骨缺损区，B、C组骨痂形成致密，骨缺损区完全愈合，骨折端连接良好；术后12周，各组骨缺损区完全愈合，骨折端连接良好。②血清C反应蛋白：在术后第1周时B组显著低于A组水平（p＜0.05），C组显著低于B组水平（p＜0.05），第4周时A组仍维持在较高水平，B、C组接近正常水平。③血沉：在术后第2周时B组显著低于A组水平（p＜0.05），C组显著低于B组水平（p＜0.05），第4周时A组仍维持在较高水平，B、C组接近正常水平。④植骨区X线观察及评分：4周时A组可见有骨痂形成，仍可见植入之颗粒骨，骨折线清晰，B、C组可见有骨痂形成基本连接骨段端；8周时A组骨痂量增加，骨折线已基本消失，髓腔尚未通，B、C组新生皮质骨结构出现，与宿主皮质骨连接，髓腔已基本再通；12周时三组均可见骨缺损区已达骨性愈合，髓腔再通。术后第2、4、8周B组X线和组织学评分均优于A组,差异有统计学意义（P <0.05），B、C组差异无统计学意义（P>0.05）。第12周A、B、C三组X线评分差异无统计学意义（P>0.05）。⑤植骨区组织学观察及评分：2周时A组可见植入之大块颗粒骨组织，有纤维组织填充，B、C组见有大量软骨岛形成，C组亦可见有部分微球未被吸收，附着于软骨岛附近。4周时A组骨小梁稀疏，走行不规则，B、C组骨小梁较为致密，走行较为一致，C组新生骨组织周围未发现有微球存在。8周时A组骨小梁走行一致，原始髓腔将要形成，B、C组骨小梁形成的编织骨已逐渐向板层骨过渡，骨板周围见大量成骨细胞，髓腔基本贯通。12周：三组骨缺损区编织骨被板层骨替代，骨质较厚为片状，骨陷窝大量分布其中，髓腔再通。术后2、4、8、12周组织学评分A、B组相比差异均有统计学意义（P＜0.05），B、C组相比差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：1、利用W/O/W方法制作的万古霉素缓释微球，对万古霉素药物本身无影响。2、万古霉素PLGA缓释微球在作用于金黄色葡萄球菌时，其抑菌效果与单纯万古霉素相同，且抑菌时间长。3、手术彻底清创后，自体微小颗粒骨复合万古霉素缓释微球植入法，对于治疗感染性骨缺损是可行的。4、对于治疗感染性骨缺损时，万古霉素缓释微球对成骨作用无影响。5、对于感染性骨缺损家兔的治疗，局部应用万古霉素缓释微球其疗效与单纯万古霉素相同。