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猪传染性胃肠炎(Porcine transmissible gastroenteritis, TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)引起的猪的一种以腹泻、呕吐、脱水等为主要症状的高度接触性消化道传染病,对两周龄以内的仔猪致死率可达100%,给全球养猪业造成了巨大危害。在TGEV基因组中,ORF2编码的S蛋白携带有主要的B细胞抗原识别决定簇,经研究证实S蛋白N端的543个氨基酸残基内含有A、B、C、D四个抗原位点,是唯一能诱导机体产生中和抗体的主要结构蛋白。因此,S蛋白的表达对TGEV基因工程疫苗和疾病诊断试剂的研制具有重要意义。本研究根据已发表的TGEVS基因cDNA序列,设计并合成了3对特异性引物,通过PCR扩增得到4个含有不同抗原位点的S基因片段：含D位点的S2基因,含A位点的S3基因,含A和D位点的S(2+3)基因以及含有A、B、C和D位点的Sfull基因。将S基因分别克隆到pMD19-Tsimple载体并进行测序鉴定。用DNA star软件将测序结果中不同S基因与Genebank中收录的TGEV S基因参考序列相比较,其核苷酸同源性为100%。将测序验证正确的S基因的不同片段分别克隆到杆状病毒转移载体pFBDMY-IM中,随后将获得的阳性重组转移载体通过Tn7转座重组至杆状病毒Bacmid中,然后将重组Bacmid转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒。将重组病毒感染Sf9昆虫细胞,72小时后用荧光显微镜进行观察,发现Sf9细胞出现明显的细胞病理变化和红色荧光,说明重组杆状病毒已经成功构建。提取重组杆状病毒基因组DNA并用TGEV S基因的特异性引物进行PCR鉴定,结果证实TGEV S基因已经成功重组至杆状病毒基因组中。用SDS-PAGE和Western Blot分析蛋白表达产物,结果表明：S2、S3、Sfull基因在杆状病毒表达系统中成功得到表达,表达的重组蛋白大小分别为25.9 KDa、27.5KDa和85.1KDa；S(2+3)基因在杆状病毒表达系统中没有表达。因此,本研究将含不同抗原位点的S基因片段在杆状病毒表达系统中进行表达,为以后利用S蛋白开发TGEV基因工程疫苗和疾病诊断试剂奠定了基础。