【摘 要】
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核膜连接蛋白ApcE将蓝藻藻胆体锚定到内囊体膜上,并在藻胆体能量传递方面发挥重要作用。利用蛋白质工程技术,从以下两个方面对其进行研究。 ApcE在大肠杆菌体内表达形成包
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核膜连接蛋白ApcE将蓝藻藻胆体锚定到内囊体膜上,并在藻胆体能量传递方面发挥重要作用。利用蛋白质工程技术,从以下两个方面对其进行研究。 ApcE在大肠杆菌体内表达形成包涵体,阻碍了对它的进一步研究。本课题构建ApcE(1-240)与AphA(287-765)的融合蛋白,以期改善ApcE蛋白的溶解性。获得的融合蛋白溶解度没有达到预期的效果。 ApcE与ApcF被认为在蓝藻中会形成复合物。本课题利用体内重组技术,将以上两个基因,和能够产生PCB的质粒pACYCDuet-ho1-pcyA在大肠杆菌中共表达,通过光谱性质来检测复合物的形成,没有发现明显的复合物形成的证据。 藻胆蛋白由藻胆色素与相应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸的巯基以硫醚键共价结合而成。这一反应一般需要相应的裂合酶催化进行。催化藻红胆素PEB连接到PE脱辅基蛋白上的裂合酶还没有完全找到。本课题通过同源性分析,在藻种Gloeobacter violaceus PCC7421中挑选了最有可能的20个基因。通过体内重组技术挑选出催化PEB与CpeB的连接的裂合酶。确定了 glr1192编码的蛋白有CPE的Cys-80位催化活性。
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