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目的 研究光敏免疫偶联物血卟啉-赫赛汀(HP-Herceptin)的双重导向作用,体外作用于人乳腺癌细胞,对肿瘤细胞的杀伤效果进行检测并对其抗肿瘤效果进行评价,以期提高光动力治疗的靶向性,寻求更为有效的光免疫临床治疗方法。 方法 1、对人乳腺癌细胞BT-474肿瘤细胞株进行传代培养,并用流式细胞术测定其细胞表面HER-2表达率; 2、用碳二亚胺(EDCI)作为缩合剂,将光敏剂血卟啉与单克隆抗体Herceptin偶联,对HP-Herceptin偶联物进行透析、凝胶过滤纯化。 3、用薄层层析法、紫外分光光度计法,红细胞溶血试验ELISA法对偶联物进行定性及定量。 4、用MTT法测定HP-Herceptin体外对BT-474细胞的杀伤作用。 5、用FCM法测定HP-Herceptin体外对BT-474细胞的杀伤及凋亡作用。 [结果] 1、BT-474细胞经过复苏、传代培养后,生长状态良好,细胞成团块生长,单个细胞体积大,圆型透亮。流式细胞术(本院血液科实验室)测定BT-474细胞表面HER-2表达率为99.42%。 2、HP与Herceptin经过偶联后,经过PBS液透析,装柱于G-25葡萄糖凝胶柱