猴头菌菌丝体中猴头菌素提取分离及生物活性研究

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猴头菌作为一种珍贵的大型食药真菌,具有十分重要的生物活性。本文则以猴头菌发酵所得到的菌丝体为原料,研究猴头菌发酵菌丝体中活性物质的乙醇回流提取工艺参数优化,醇提物质中猴头菌素的分离纯化、初步结构分析及体外生物活性。结果如下:(1)原料猴头菌发酵菌丝体采用酶解和酸解相结合的前处理,再通过响应面优化乙醇回流提取的最佳工艺为:料液比1∶36 g/mL,提取温度63℃,提取时间92 min,猴头菌醇提活性物质得率为3.39%。(2)将猴头菌发酵菌丝体醇提活性物质进行浓缩,水溶后滤除水不溶性杂质,先通过石油醚萃取,再通过乙酸乙酯进行萃取得到萜类活性物质,乙酸乙酯萃取液用0.45μm有机膜过滤,通过气质联用分析,结果显示乙酸乙酯萃取液中萜类和甾体类组分占67.25%。(3)采用硅胶柱层析和半制备高效液相色谱对猴头菌素萜类活性物质进行分离纯化,得到一种化合物Fr-3-1。通过薄层色谱、高效液相色谱检测,可得Fr-3-1的纯度高达94.59%。通过化学分析和UV、IR、LC-MS、1H NMR等波谱数据分析,基本可以确定Fr-3-1就是猴头菌素A。(4)化合物Fr-3-1以BHT、PG为参照做了体外抗氧化实验。结果显示,还原力与Fr-3-1的浓度在一定范围呈线性相关,清除超氧阴离子、DPPH·自由基和ABTS+·自由基的EC50=0.93、1.21、0.40 mg/mL。(5)化合物Fr-3-1以山梨酸钾为参照做了体外抑菌活性实验。实验结果表明Fr-3-1对金黄色葡萄球菌显示出良好的抑菌活性,MIC为0.78 mg/mL。(6)化合物Fr-3-1对抑制人胃癌细胞(MGC-523)的研究显示Fr-3-1抑制人胃癌细胞的效果随着浓度的增加而增加,IC50值为453.14μg/mL。(7)化合物Fr-3-1促进大鼠星型神经胶质细胞(Ra)分泌神经生长因子(NGF)作用的研究显示Fr-3-1样品对大鼠星型神经胶质细胞的分泌神经生长因子的促进作用强于常用神经生长因子促进剂肾上腺素。在浓度100μg/mL时,Fr-3-1促进分泌神经生长因子浓度为46.63 pg/mL,远高于同等浓度肾上腺素刺激分泌的神经生长因子浓度37.77 pg/mL。
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