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2016年,我国的高血压患者超过3.3亿人,因高血压诱发死亡的人数占全年死亡人数的51%。长期服用降压药物会带来多种副作用,因此,寻求更为安全有效的降压药物具有现实意义。红松(Pinus konaiensis Sieb.et Zucc.)的果实红松仁蕴含丰富的营养元素。采用Osborne法对松仁蛋白进行分离得到清蛋白。清蛋白是水溶蛋白,并含有人体所需的8种必需氨基酸,对比其他组分蛋白,人体更易吸收清蛋白。本文以松仁清蛋白为原料,利用碱性蛋白酶制备松仁ACE抑制肽,并进行分离纯化和结构鉴定,利用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)评价松仁ACE抑制肽的降血压活性,并进行体外稳定性试验,论文主要研究结果如下:以长白山红松松仁清蛋白为原料,用Alcalase 2.4L进行酶解制备酶解产物,通过5组单因素试验和四因素三水平的响应面(Box-Benhnken)优化试验,确定酶解条件为:酶解pH 9.0,温度55℃,加酶量10000 U/g,底物浓度2%。在该水解条件下,水解产物ACE抑制率达75.2%,这与模型预测值相符。对红松仁清蛋白酶解物进行超滤分离、Sephadex G-25、Sephadex G-15以及RP-HPLC四步纯化,最终得到活性最好的组分F3,ACE抑制率高达93.7%。利用电喷雾串联质谱仪(ESI-MS/MS)对组分F3进行结构分析得到19个肽段,经分析验证确定3个具有ACE抑制活性的氨基酸序列,为Tyr-Leu-Val-Pro-His(YLVPH)、Tyr-Arg-Leu-Asp(YRLD)和Tyr-Leu-Leu-Lys(YLLK),相对分子质量分别为627.34、565.29和535.34 Da。经固相合成得到纯度为98%的3种多肽,IC50测定结果分别为0.1510、0.1907、0.2825μmol/L,多肽的分子量和序列结构与理论值相符。对ACE抑制肽YLVPH、YRLD和YLLK进行体外稳定性试验,结果显示:ACE抑制肽在20~100℃之间、pH为2~10的条件下,抑制率保持在80%以上,说明多肽具有耐热性和耐酸碱性;NaCl浓度超过0.4 mol/L时,多肽的抑制活性极显著降低(P<0.01),抑制率维持在50%左右;不同金属离子作用于多肽,抑制肽的抑制率都有所降低、保持在50~80%的范围内;体外模拟胃肠环境验证得到,ACE抑制肽YLVPH、YRLD和YLLK均对肠胃消化酶有抗性,虽抑制活性降低,但ACE抑制率保持在50%以上,说明多肽摄入人体并通过人的消化系统仍可保持活性,可以在功能器官或细胞上发挥作用,从而使人体血压得到控制。利用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)讨论ACE抑制肽可能的降血压作用机理。通过观察细胞活力试验、分析检测胞内ROS水平、NO释放量和SOD活性,进一步从细胞层面上验证YLVPH、YRLD和YLLK的降血压效果。表明ACE抑制肽作用于调节血压相关的细胞和组织,通过提高SOD活性、增加NO释放量和降低ROS的释放从而达到降低血压的效果。本试验结果为食源性ACE抑制肽的进一步研究奠定重要的理论基础,提高了长白山松仁蛋白的利用率,红松松仁清蛋白ACE抑制肽可以作为降血压功能食品得到进一步的开发。