目的：探讨不同冷冻温度、时间对异种骨免疫原性的影响。方法：将猪松质骨粒分为A：新鲜骨组、B：-80℃冷冻组、C：液氮冷冻组、D：-80℃冷冻加酶处理组、E：液氮冷冻加酶处理组,其中B、C、D、E组内按照不同冷冻时间,各分为冷冻一周、二周、三周、一月、二月、三月制备骨材料。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、淋巴细胞刺激实验检测各组骨材料,筛选出较优冷冻时间的骨材料代表该组,分别标记为B1、C1、D1、E1组。采用一般形态观察、组织病理学观察、免疫组织化学染色、ELISA及淋巴细胞刺激实验等指标比较A、 B1、C1、D1、E1组骨材料免疫原性的大小。结果：异种骨的免疫原性随冷冻时间的延长而逐渐降低,冷冻二月与之前冷冻时间点的骨材料比较显著降低(P<0.05),与冷冻三月的骨材料比较无明显差异(P>O.05),故冷冻二月为异种骨较理想的冷冻时间,制备出A：新鲜骨组、B1：-80℃冷冻二月组、C1：液氮冷冻二月组、D1：-80℃冷冻二月加酶处理组、E1：液氮冷冻二月加酶处理组。比较各组骨材料的免疫原性发现：B1、C1、D1、E1组均比A组有显著降低(P<0.05),其中D1组、E1组低于B1组及C1组(P<0.05),而D1组与E1组无明显差异(P>0.05),B1组与C1组无明显差异(P>0.05)。结论：-80℃冷冻二月为异种骨较理想的冷冻温度和时间,该冷冻条件加酶处理可以有效去除异种骨的主要抗原,降低其免疫原性。