金丝桃素是贯叶连翘中重要的生物活性物质,具有抗抑郁、抗病毒、抗肿瘤、抗菌及提高免疫力等功能。目前金丝桃素主要是从贯叶连翘中提取而获得,提取物中金丝桃素的含量较低,且夹杂很多黄酮、酚类、丹宁等物质,这些物质往往是贯叶连翘提取物副作用的来源。金丝桃素合成酶是金丝桃素合成过程中的关键酶,可以催化大黄素生成金丝桃素。利用酶法生产金丝桃素具有反应条件温和、产物单一易纯化等优点,有良好的发展前景。本论文主要结果如下: 1、经RT-PCR获得了编码金丝桃素合成酶的基因（Hyp）,将其克隆至原核表达载体pET30a中,得到了重组质粒pET30a-Hyp,转化Ecoli BL21得到工程菌株,工程菌经IPTG诱导,高效表达了重组蛋白即金丝桃素合成酶（Hyp）,经检测判定Hyp具有催化大黄素合成金丝桃素的功能。 2、进行了工程菌发酵条件的优化,得到较为适宜的培养条件如下:采用初始pH为7.0的TB培养基,接种量1%,37℃ 140r/min培养至OD₆₀₀为0.6左右（约3h）,然后加入IPTG至终浓度为0.5mM进行诱导,诱导温度为30℃,转速为120r/min,诱导8h后收集菌体。 3、离心发酵液以收集菌体,用缓冲液悬浮菌体,经过超声破碎、硫酸铵分级沉淀和Ni-NTA亲和层析,得到了电泳纯的Hyp。酶学性质研究结果表明,该酶适宜的反应温度为30℃,适宜反应pH为6.0,底物大黄素适宜处理方式为乙醇溶解,米氏常数K_m=5.049μmol/L,V_max=0.0831μg/h·mg。