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目的GBM(glioblastoma,神经胶质母细胞瘤)是CNS(central nervous system,中枢神经系统)的高侵袭性和治疗极具挑战性的原发性肿瘤,目前可获得的治疗对这种疾病患者只有有限的效果。因此,开发新的治疗靶点和有效的治疗策略至关重要。ACNU(nimustine,盐酸尼莫司汀)广泛用作标准化疗药物,经常与其他化疗药物以联合用药的形式进行临床研究。姜黄素是一种天然多酚类化合物,有与其他化疗药物联合用于肿瘤治疗的可能性。然而,没有关于ACNU和姜黄素联合用于GBM治疗的研究报告,并且其活性的机制仍然知之甚少。在本研究中,我们探索了姜黄素和ACNU联合治疗对GBM细胞的影响与其机制。方法在本实验中,采用CCK8法测姜黄素和尼莫司汀不同处理人神经胶质瘤细胞U251、U118和U87后的细胞活力;同时也姜黄素与尼莫司汀对人正常神经胶质细胞SVGp12细胞活力的影响。通过划痕实验,侵袭实验和细胞集落形成实验研究了姜黄素与尼莫司汀联合用药对人神经胶质母细胞瘤细胞侵袭与迁移活性的影响。利用流式细胞技术进行了细胞周期测定和细胞凋亡检测,研究姜黄素与尼莫司汀联合用药对人神经胶质母细胞瘤细胞的促细胞自噬作用与细胞周期抑制作用。在分子机制研究中,运用激光共聚焦免疫荧光技术,研究在姜黄素与尼莫司汀联合作用于U87后,细胞线粒体内外细胞色素c,及p50与p65的变化;采用Western blot研究了细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl和Bax,细胞周期蛋白Cyclin B1、CDK1和CDK2,细胞迁移侵袭相关蛋白N-cadhetin、MMP2和MMP9,PI3K/AKT通路蛋白和NF-κB/COX-2通路相关蛋白水平,在姜黄素和尼莫司汀联合作用于神经胶质母细胞瘤细胞系后的变化;利用Real-time quantitative PCR(q PCR),研究姜黄素与尼莫司汀联合作用于神经胶母细胞瘤细胞系U118和U87,对COX-2 m RNA水平的影响。结果与姜黄素或ACNU单独用药相比较,联合用药能够通过抑制N-cadherin和MMP2/9蛋白表达,抑制人神经胶质母细胞瘤的细胞迁移与侵袭活性。同时联合用药还能强化药物对人神经胶质瘤细胞的增殖抑制作用。其主要机制通过3条途径完成:第一条是通过抑制p65/p50二聚体的激活与核内转移抑制NF-Κb,从而抑制COX-2表达;第二条是通过抑制p-PI3K和AKT信号通路的激活;第三条是通过促进细胞色素C从线粒体转移到细胞质当中促进细胞凋亡相关蛋白表达;在通过以上三条途径共同抑制细胞增殖。此外下调Cyclin B1、CDK1、CDK2诱导细胞周期阻滞。通过以上机制共同作用达到抑制肿瘤生长的目的。结论本实验发现姜黄素能够通过同时靶向调节N-cadherin/MMP2/9,cyto c/caspase,PI3K/AKT和NF-κB/COX-2信号通路加强ACNU对人神经胶质母胶质瘤的细胞增殖和侵袭抑制作用,同时还增加其诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用。姜黄素和ACNU的联合治疗将有可能成为神经胶质母细胞瘤治疗方案的新选择。