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目的:通过体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,hRPE)来研究转化生长因子β1、血小板源性生长因子对人类视网膜色素上皮细胞增殖的作用,并探索用内路法进行兔RPE细胞视网膜下腔的移植。方法:取自愿者贡献的意外事故成年眼球,用0.25%胰酶消化获取人RPE细胞、15%胎牛血清的DMEM培养液培养,细胞接近融合状态时进行传代培养。取第2代hRPE用转化生长因子β1、血小板源性生长因子及PDGF+ TGFβ1进行增殖试验,用细胞计数和MTT法定量测定细胞量。同样方法体外培养有色素兔视网色素上皮细胞,将体外传代培养的第2-3代细胞悬液用微量注射器通过内路法移植入受体视网膜下腔。结果:hRPE原代细胞镜下为圆形,大小不一,内含较多的色素颗粒,胞核无法辨认。原代细胞培养贴壁后第3天增殖速度明显加快,至4-5天即可基本融合,细胞浆内色素颗粒则随传代次数增多而逐渐减少。第3代培养的视网膜色素上皮细胞膜表面可见胞浆突起,细胞核多呈不规则形,核内以常染色体为主。细胞质内细胞器丰富,粗面内质网多,滑面内质网也较多,分布于大量糖原颗粒中。黑色素小体散在或集中分布于胞浆内,细胞浆内可见不同成熟阶段的黑色素小体。在血清的协同作用下50ng/mlPDGF明显刺激hRPE生长,但这种细胞的增殖被10ng/ml的TGFβ1所阻滞。术后4周无色素兔视网膜下腔可见供体RPE细胞,电镜观察证实存活<WP=4>的供体RPE细胞仍有合成色素功能。结论:已基本建立人视网膜色素上皮细胞体外原代细胞培养方法,hRPE细胞在体外呈现出旺盛的分裂能力和代谢功能。第3代培养的视网膜色素上皮细胞基本保留了原代细胞的生物学特性,如合成黑色素颗粒的特性。 10ng/ml的 TGFβ1能阻滞由PDGF引起的人视网膜色素上皮细胞的增殖作用,TGFβ1抑制hRPE增殖的作用机理仍需进一步研究。内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下腔,为RPE移植的实验室研究提供一条可借鉴的途径。