两株丝状真菌N3、N9的分类鉴定

来源 :山西大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:TDH39520007
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本实验室从一酸奶样品中分离到两株丝状真菌N3、N9。通过形态学观察、RAPD分析及5.8SrDNA及ITS区序列测定并结合出菇试验,初步确定了N3、N9菌株的分类地位以及它们与其近缘种的生物系统学关系。 1分别观察了N3、N9菌株在PDA培养基上的菌落特征和菌丝体形态特征。结果表明:N3、N9菌株在PDA培养基上25℃培养7d后菌落生长旺盛,呈丝状辐射生长,表面呈绒絮状,圆形,平坦。菌丝浓密,粗壮,多气生菌丝,菌丝体上具有明显的锁状联合结构,故初步判定N3、N9菌株为担子菌。 2比较了CTAB、SDS-CTAB和氯化苄这3种DNA提取方法提取8株担子菌DNA的效果。结果表明:CTAB法和SDS-CTAB法只适合于部分菌株的DNA提取,对另外一些菌株则提取不出谱带清晰的DNA而氯化苄法适合于所有供试菌株的DNA提取,所有菌株的DNA凝胶电泳图谱带清晰,效果很好。同时研究比较了液氮研磨和提取液的pH值对氯化苄法提取DNA效果的影响。 3运用RAPD技术对N3、N9菌株和6株担子菌标准菌株进行了比较。首先从40个10bp引物中筛选出18个有效引物,用于所有供试材料基因组DNA样品的扩增。这18个引物对8株供试菌株均能扩增出清晰的谱带。对RAPD结果进行聚类分析,构建了供试菌株基因型的亲缘关系图。从聚类图上可以看出,菌株N3、N9与糙皮侧耳(Pleurotusostreatus)白平菇、糙皮侧耳澳黑平菇、姬菇(P.limpidus)河北33、毛头鬼伞(Coprinuscomatus)聚为一类,而香菇(Lentinusedodes)、金针菇(Flammulinavelutipes)聚为另一类。其中菌株N3、N9与白平菇的亲缘关系最近,与澳黑平菇、河北33的亲缘关系稍近一些,故可初步确定N3、N9菌株应属于侧耳属。 4再次运用RAPD技术对N3、N9菌株和侧耳属7株菌株进行了聚类分析。以扩增条带清晰、多态性丰富和重现性好为原则,从40个10bp引物中筛选出了21个有效引物,用于所有供试材料基因组DNA样品的扩增。聚类结果表明:菌株N3、N9与白平菇相似程度最高,三者最先合并,之后与澳黑平菇、河北33、姬菇黑平1号归为一类,而鲍鱼菇(P.abalonus)、金顶侧耳(P.citrinopileatus)、阿魏侧耳(P.ferulae)归为另一类。故可在第一次聚类的基础上进一步确定N3、N9应属于侧耳属,且与白平菇的亲缘关系较近。 5对N3、N9菌株的5.8SrDNA及ITS序列进行PCR扩增和序列测定,并将这两株菌株与Genbank中登录的糙皮侧耳、哥伦比亚侧耳(P.columbinus)、灰白侧耳(P.spodoleucus)等共18株菌株的5.8SrDNA及ITS序列进行聚类分析。系统聚类树结果表明:菌株N3、N9在聚类树上被聚在以糙皮侧耳为代表的分支中,其中N3与灰白侧耳的ITS1-5.8S-ITS2基因序列同源性最高,其Bootstrap支持率为100%,二者很可能是同一个种;N9与佛罗里达侧耳(P.floridanus)的ITS1-5.8S-ITS2基因序列同源性最高,其Bootstrap支持率为99%,也显示出十分密切的遗传亲缘关系,提示N9可能属于佛罗里达侧耳。 6对N3、N9菌株进行了出菇试验。出菇试验表明:N3、N9菌株均具有结实能力,其桑椹期的形状和子实体的形态结构与侧耳属的子实体相同。
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