【摘 要】
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杀菌/通透性增加蛋白（bactericidal/permeadbility-increasing protein,BPI),简称杀菌蛋白,是哺乳动物白细胞中存在的一种碱性蛋白,它能与革兰氏阴性菌脂多糖（LPS）结合,具有中和
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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杀菌/通透性增加蛋白（bactericidal/permeadbility-increasing protein,BPI),简称杀菌蛋白,是哺乳动物白细胞中存在的一种碱性蛋白,它能与革兰氏阴性菌脂多糖（LPS）结合,具有中和内毒素和杀灭细菌的作用,在革兰氏阴性菌感染的治疗上有良好的发展前景.BPI全长约456个氨基酸,其氨基端约200个氨基酸（BPI<,23>）具有完整蛋白的全部生物活性.为获得重组人BPI（rhBPI)在CHO细胞中的高水平表达,构建出租种以二氢叶酸还原酶基因（dhfr)为筛选标记的真核表达质粒.将这些质粒分别转染CHO（dhfr)细胞,经过氨甲喋（MTX）加压筛选,获得多株稳定表达rhBPI的细胞株,表达量最高可达4μg/ml.比较发现,含EF1-α启动子的质粒与含CMV启动子的质粒表达效率相似;dhfr的弱化有利于rhBPI的表达.对rhBPI初步纯化后进行杀菌实验.结果表明重组蛋白具有与天然蛋白类似的杀菌活性.用PCR方法获得hBPI<,23>和人IgG1 Fc(Fcγ1)融合基因.构建了含上述融合基因的真核表达质粒pE2-BFc和pE2-hBFc.用同样方法又构建了表达猴.兔BPI<,23>和Fcγ1融合基因的表达质粒pE2-mBFc和pE2-rBFc.BPI基因的克隆和在CHO细胞中的表达为今后的应用研究打下了基础.对BPI DNA改组的初步研究.也为进一步探索BPI的杀菌机理,进行其它分子生物学改构提供了参考.
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