本研究以家蚕大造为材料，以脂肪体cDNA为模板克隆了家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5基因，并进行了序列分析。构建了原核表达载体，获得了重组的目的蛋白，以纯化后的目的蛋白为抗原免疫昆明小鼠，制备了Serpin-5蛋白的多克隆抗体。采用此抗体分析了serpin-5在正常5龄3天的家蚕中肠、丝腺、脂肪体、马氏管、精巢、卵巢，蛋白水平的组织表达。对家蚕BmN细胞和5龄3天家蚕进行了RNAi研究，采用荧光定量PCR测定了干扰后目的基因在家蚕幼虫多个组织不同时段的转录水平。主要研究结果如下：1.以反转录的家蚕5龄幼虫脂肪体cDNA为模板， PCR扩增获得了Bmserpin-5基因序列。测序分析表明，克隆的目的基因serpin-5长度为1140bp，编码379个氨基酸残基。预测蛋白质分子质量为42.6kDa，等电点为6.02。目的基因（GeneBank登录号：AY566165）是开放阅读框（ORF)去除信号肽的片段。用Signal P3.0Server分析Bmserpin-5，推测其第1到第16个氨基酸残基为信号肽序列。2.将目的基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经1mmol/L IPTG诱导蛋白表达。重组菌液经超声波破碎、离心后获得上清和沉淀，以诱导的空载体菌和未诱导的重组菌作为对照，进行SDS-PAGE检测。结果表明：在诱导的转化去除信号肽的pET28a-serpin-5，超声裂解后的沉淀中出现了一条约为43kDa特异性的蛋白条带，预测的成熟BmSerpin-5蛋白分子量约为42.6kDa，而超声裂解后的上清中没有出现特异性的条带，表明去信号肽Bmserpin-5基因在大肠杆菌中得到成功表达并多以包涵体的形式存在。3.诱导获得大量的重组蛋白，采用镍柱纯化回收，获得目的蛋白，以此为抗原免疫昆明小鼠，Western blot检测制备的多克隆抗体具有较高的特异性，ELISA检测该多抗对免疫抗原的效价达到1∶24000，特异性较好。4.在制备高效价抗体的基础上，采用Western blot法检测了BmSerpin-5蛋白在多个组织中的表达，结果表明在5龄第3天幼虫精巢、卵巢中的表达量较高，中肠次之，在丝腺、马氏管、脂肪体中的表达量较低。BmSerpin-5蛋白在生殖腺中的高表达，推测与家蚕的生殖生理相关。5.在家蚕卵巢细胞BmN中对设计的siRNA片段进行筛选，获得干扰效果显著的有效片段。有效片段转染家蚕五龄第三天幼虫后，用荧光定量PCR的方法测定精巢、卵巢、丝腺、脂肪体、血液、表皮、马氏管在24h，36h，48h后的转录表达特征。结果表明：与对照相比，在精巢、丝腺、脂肪体中mRNA的转录水平无明显变化；在血液、表皮中48h时都降低了约3倍，卵巢中降低了约4倍，马氏管中降低的最多，约9倍。干扰后测定血液中酚氧化酶的活性，发现酶的活性随时间的延长而逐渐升高，48h时升高了约1.5倍。干扰后，血液中的Bmserpin-5降低了3倍，酚氧化酶活性升高了1.5倍，推测Bmserpin-5与血液中的酚氧化酶存在抑制关系，可能参与了家蚕的先天免疫反应过程。本文克隆了家蚕serpin-5基因cDNA序列，构建了重组表达载体，进行了原核表达和多克隆抗体制备，并利用制备的多克隆抗体检测了家蚕serpin-5蛋白在五龄三天幼虫组织中的表达水平，获得初步结果，为阐明BmSerpin-5蛋白功能积累了原始数据，打下了较好的基础。