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目的:制备抗重组人胱抑素C(cystatin C,Cys C)单克隆抗体,并测量其浓度,对其生物学性质进行一个初步鉴定(包括免疫反应性、亚型、效价、相对亲和力、是否能与天然蛋白结合)。为进一步组装Cys C临床测量试剂盒,以及探究Cys C的其他生物学作用打下牢固的基础。方法:以本实验室原核表达的人Cys C重组蛋白免疫BALB/c小鼠,在聚乙二醇1500的作用下使小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0发生融合,采用有限稀释法筛选出稳定分泌抗Cys C的杂交瘤细胞株(即阳性克隆),向BALB/c小鼠腹腔注入杂交瘤细胞,抽取小鼠产生的腹水,采用protein A亲和层析柱纯化腹水。测定单克隆抗体的浓度使用BCA法,测定单克隆抗体的免疫反应性使用Western Blot,测定单克隆抗体的亚型、效价和相对亲和力使用间接ELISA法。将辣根过氧化物酶(HRP)与单克隆抗体偶联,重组蛋白作为抗原筛选出最佳配对抗体,并用双抗夹心法测定天然Cys C蛋白。结果:运用经典的单克隆抗体制备技术,筛选出了抗Cys C单克隆抗体的7株杂交瘤细胞,分别命名为4E3、4G2、4E2、4H2、4G4、8E1、8G4。向小鼠腹腔注入杂交瘤细胞,获得了抗Cys C单克隆抗体浓度很高的腹水。protein A亲和层析柱纯化腹水效果良好,测定已纯化的抗体浓度最高的可达1.475mg/m L。7株单克隆抗体均有较强的免疫反应性和较高的相对亲和力,经抗体亚型鉴定,其中5株为Ig G1型,2株为Ig G2a型。使用间接ELISA法检测自主研发的抗体效价均可达1:104。采用双抗夹心法,当8E1作为包被抗体,8G4作为酶标抗体的情况下,测得的OD值最高,使用此抗体对可以检测出血清中的天然Cys C。结论:(1)创建了抗重组人Cys C单抗杂交瘤细胞库,经有限稀释法筛选得到了7株抗Cys C单抗杂交瘤细胞。(2)通过杂交瘤培养技术和小鼠腹腔注射制备了大量的单克隆抗体,纯化后对其生物学性质进行了初步鉴定,证明了其具有良好的抗体反应性及亲和力。(3)医院收集的天然Cys C可与自主研发的单克隆抗体相结合,为今后进一步建立Cys C检测方法,组装商品化试剂盒打下了牢固的基础。