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目的:探讨Oct4B1在结直肠癌干细胞中的作用及其作用机制是否与Twist调控上皮间质转化(EMT)过程有关。方法:1:结直肠癌SW480细胞系(亲本细胞)通过在添加含EGF、b FGF、B-27等生长因子的无血清培养基培养3D微球体。2:采用分化实验、软琼脂克隆实验及流式细胞技术检测3D微球体和亲本细胞中肿瘤干细胞(CSCs)标记物CD133、CD44表达,鉴定3D微球体是否富集结直肠癌干细胞(SW480CSCs)。3:实时荧光定量PCR(q PCR)技术检测SW480CSCs与亲本细胞中Oct4B1的表达。4:采用Western blot技术及细胞免疫荧光技术检测SW480CSCs和亲本细胞中上皮细胞标记物E-钙粘蛋白(E-cadherin)和间质细胞标记物N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,q PCR检测SW480CSCs与亲本细胞中的Twist表达;5:分析Oct4B1和Twist在SW480CSCs中的相关性。结果:1:普通SW480结直肠癌细胞在添加含EGF、b FGF、B-27等生长因子的无血清培养基中能形成悬浮生长的3D微球体;2:①3D微球体能在10%FBS培养基中分化为形态类似于亲本细胞的贴壁细胞,传代后能继续生长,且形态无明显变化;②3D微球体的体外克隆形成能力明显高于亲本细胞(P<0.01);③流式检测发现3D微球体中CSCs标记物CD133、CD44表达明显高于亲本细胞,分别是后者的2倍和4倍左右(P<0.01和P<0.02);3:Oct4B1 m RNA在SW480CSCs中的表达明显高于亲本细胞,约为27倍(P<0.01);4:在SW480CSCs中,上皮细胞标记物E-钙粘蛋白表达明显低于亲本细胞(P<0.01),而间质细胞标记物N-钙粘蛋白和波形蛋白却显著高于亲本细胞(P<0.01);细胞免疫荧光技术检测发现E-钙粘蛋白荧光强度在SW480CSCs中明显低于亲本细胞,而N-钙粘蛋白和波形蛋白却显著高于亲本细胞;5:Oct4B1及Twist在SW480CSCs中呈正相关关系(r=0.925)。结论:1:添加EGF、b FGF、B-27等生长因子的无血清培养基能使普通肿瘤细胞形成悬浮生长的3D微球体;2:3D微球体较亲本细胞富集CSCs特性(即称3D微球体为SW480CSCs);3:Oct4B1参与SW480CSCs干性富集,且SW480CSCs较亲本细胞发生了明显的EMT过程;4:Oct4B1参与SW480CSCs的干性调节可能与Twist相互作用调节EMT过程有关。