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H5N1禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)属于高致病性流感病毒,对家禽生产造成巨大的威胁。禽流感病毒遗传物质为单股负链RNA,包括血凝素蛋白HA等8个基因片段。禽流感病毒的复制必须依赖于宿主细胞系统完成。目前,关于禽流感病毒蛋白的结构和功能等研究进展显著,但有关禽流感病毒感染过程中与宿主的互作和关键宿主蛋白的鉴定还有待深入研究。本研究中,以禽流感H5N1 A/Chicken/ShanXi/2/2006毒株cDNA为素材,利用亲和纯化-质谱技术(AP-MS),开展了病毒-宿主蛋白互作组的研究。主要结果如下:1、利用pcDNA3.1-3×Flag-C载体构建了分别含有8个禽流感病毒基因片段的表达载体,以Lipofectamine3000转染鸡胚胎成纤维细胞(DF1),经Western blot检测8个病毒蛋白表达载体均可在DF1中高效表达;2、利用免疫共沉淀技术富集病毒-宿主蛋白复合物,将质谱鉴定到的与病毒蛋白有相互作用的宿主蛋白经SAINT算法对其互作的可能性进行预测和评分,分值>0.9为高置信度蛋白互作,结果表明,和病毒蛋白有相互作用的宿主蛋白有1115个,其中与病毒聚合酶蛋白PA、PB1、PB2、核蛋白NP、血凝素蛋白HA、神经氨酸酶NA、凋亡前提蛋白NS1、基质蛋白M1的宿主互作蛋白个数分别是:134、36、595、64、238、164、145、53。利用Cytoscape软件构建了H5N1禽流感病毒-宿主蛋白互作网络,绘制了重要宿主互作蛋白参与病毒复制过程中细胞结构模式图;3、利用FunRich软件对H5N1禽流感病毒的宿主互作蛋白进行结构域分析发现:具有Cation ATPase N、HELICc、DEXDc、TPR等结构域的宿主蛋白更倾向于和H5N1禽流感病毒蛋白发生相互作用;GO和Pathway分析发现:具有核酸、ATP和蛋白结合等生物学功能的蛋白及蛋白酶体、核糖体、细胞周期和细胞凋亡等信号通路的相关蛋白在病毒-宿主互作蛋白中明显富集,揭示了这些类型的蛋白和禽流感病毒感染的潜在的密切联系;4、比较分析发现了H5N1禽流感病毒和H1N1流感病毒共有的宿主互作蛋白210个,揭示了不同亚型流感病毒间宿主互作蛋白的保守性。5、免疫共沉淀结合Western blot实验证实了鸡微管动力活性蛋白WDR63和病毒PB2聚合酶蛋白、双链RNA结合蛋白STAU2和病毒非结构蛋白NS1存在相互作用,为相关蛋白互作影响病毒感染的机制研究奠定了基础。