论文部分内容阅读
萘酰亚胺荧光染料具有结构简单、易于修饰、光稳定性好、荧光量子产率高、环境敏感、较大的双光子截面积等优秀的光物理性质而被广泛应用于荧光探针领域。应用于检测亚细胞器生理变化的探针成为目前发展的热点。定位于亚细胞器同时又能检测其中物质变化的探针被大量报道。本研究基于萘酰亚胺连接不同亚细胞器定位基团,开发了监测溶酶体膜和线粒体膜微环境变化的双光子荧光探针。用于实时监测溶酶体和线粒体发生生理变化过程中其膜形态以及膜微环境极性的变化。设计合成了特异性定位于溶酶体膜的微环境极性探针MITHPN.测试了其在不同极性溶剂中的吸收光谱、荧光发射光谱、荧光量子产率、荧光寿命以及双光子性质。光物理性质显示其对不同极性环境具有很好的响应。通过细胞共定位实验确定其能专一的定位于溶酶体上,并通过氯喹诱导自噬实验和微球吞噬实验分别观察溶酶体膜在自噬和吞噬过程中的形态变化。通过荧光寿命成像实验得到正常溶酶体膜极性在39.02-38.85Kcal·mol-1之间,在氯喹刺激融合过程中其极性变小。此外,由于探针的具有很好的双光子性质成功的实现双光子共聚焦显微成像。设计并合成了线粒体膜微环境极性探针PAHPN。测试了探针PAHPN在不同极性溶剂中的紫外吸收光谱、荧光发射光谱、荧光量子产率、荧光寿命以及双光子性质,结果显示PAHPN光物理性质对环境极性敏感。通过细胞共定位实验确定其能专一的定位于线粒体上,并通过CCCP刺激实验和饥饿凋亡实验分别观察线粒体膜的形态变化。荧光寿命成像实验结果分析得到正常线粒体膜极性平均值为40.12Kcal·mol-1,在CCCP刺激后,线粒体膜极性先变小再增大,并分析了处于凋亡阶段不同细胞中线粒体膜的微环境极性。此外,由于探针的具有很好的双光子性质成功的实现双光子共聚焦显微成像。