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本研究选择PSCA(prostate stem cell antigen，前列腺干细胞抗原)作为治疗靶点，以人源的HSP70(heat shock protein 70，热休克蛋白)作为增强免疫反应的佐剂，构建了用于前列腺癌治疗用的DNA疫苗。通过在小鼠模型上系统地检测DNA疫苗的免疫效果，评价PSCA作为治疗靶点的可行性，以及HSP70分子是否能够增强DNA疫苗的免疫效果。在此基础上，系统地研究了HSP70与抗原不同的耦联方式对疫苗效果的影响，并探索了HSP70作为DNA疫苗佐剂的免疫机理，以期为进一步的临床研究铺平道路。为了构建真核表达质粒，首先从人前列腺癌细胞株DU145的cDNA中扩增出了PSCA与HSP70的基因，进而克隆至pcDNA3.1(+)载体，构建了pc-PSCA、pc-HSP、pc-PSCA-HSP和pc-HSP-PSCA四种质粒，并通过测序和RT-PCR方法确认了质粒的序列正确和表达情况。为了评价免疫DNA疫苗后的体液免疫反应，在大肠杆菌系统中表达了PSCA和HSP70的重组蛋白，并经过色谱层析技术获得了具有一定纯度的重组蛋白。随后构建了表达人PSCA的小鼠前列腺癌细胞株RM-PSCA，并建立了小鼠荷瘤模型。免疫C57BL／6小鼠后，通过ELISPOT、胞内细胞因子检测、CTL细胞活性检测和ELISA等手段检测了针对PSCA的细胞免疫和体液免疫水平。研究结果表明，免疫pc-PSCA-HSP、pc-HSP-PSCA和pc-PSCA+pc-HSP混合质粒均能够激起强烈的PSCA特异的细胞免疫反应，并且能够抑制小鼠体内PSCA表达阳性的肿瘤生长，延长小鼠的存活时间。将PSCA融合到HSP70基因的N-端能够获得最好的细胞免疫效果，但是各组之间PSCA的抗体水平没有差异。为了研究HSP70分子增强疫苗效果的免疫机理，我们通过特异性多肽刺激的方法进一步评价了PSCA和HSP70分子的CD4~+T细胞反应。结果表明，pc-PSCA、pc-PSCA-HSP、pc-HSP-PSCA和pc-PSCA+pc-HSP四个免疫组小鼠产生的PSCA特异的CD4~+T_H1细胞和CD4~+T_H2细胞水平都要强于PBS对照组，但是四组之间的差异并不显著。这一结果说明，HSP70作为DNA疫苗的佐剂并不能增强抗原特异的体液免疫反应，而其增强疫苗细胞免疫效果的作用是不依赖与CD4~+T_H1细胞反应的。而对HSP70特异的免疫反应的检测结果分析表明，pc-HSP、pc-PSCA-HSP和pc-HSP-PSCA免疫组都产生了较强的HSP70特异的CD4~+T_H2细胞反应和抗HSP70的抗体反应，但是pc-PSCA+pc-HSP混合免疫组的CD4~+T_H2细胞水平和抗HSP70的抗体水平都远远低于上述三组。另外，HSP70特异的CD4~+T_H1细胞并没有被激活。