非洲猪瘟是由双链DNA病毒中的非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,可感染不同品种及日龄的猪只,死亡率可高达100%。自1921年的全球第一起ASF疫情的发生,至今为止,ASF已蔓延至多国。2018年中国首次报道ASF,河北、安徽、湖北、吉林、香港等32个省、直辖市、特别行政区都相继有报道疫情的发生,一旦发生疫情,最有效的控制措施是扑杀,但这给养猪业造成重大的创伤,给我国畜牧业经济带来巨大损失。因此,需建立一种高特异性、高灵敏度,简单便捷的ASF检测技术。本研究建立了基于环介导等温扩增技术原理的实时荧光LAMP方法与分子信标LAMP方法,用于ASFV的实时快速检测。取得的研究结果如下:1.建立实时荧光LAMP检测方法本试验根据实验室已有的ASFV的B646L基因序列,通过分子克隆试验构建PMD18-T-ASFV-B646L质粒,并将该质粒作为试验所需模板。通过在线软件Primer Explorer 5.0引物设计软件进行LAMP引物设计,并按照GC含量、Tm值、二级结构等参数,设计筛选出一套最佳的LAMP引物,初步建立实时荧光LAMP的检测体系,并对反应体系进行反应温度、外内引物比、环引物浓度、d NTPs浓度、甜菜碱浓度、Mg SO₄浓度分别进行优化,确定实时荧光LAMP检测体系的最佳反应温度为65℃,外内引物比例为1:8,环引物LF/LB最佳浓度为20μmol/L,Mg SO₄最佳浓度为6 mmol/L,d NTPs最佳浓度为1.6 mmol/L,Bst 2.0 DNA聚合酶添加量为8 U/m L,甜菜碱最佳浓度为0 mol/L。该方法最低检测浓度可达40 coipes/μL,与猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒（PCV）、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、副猪嗜血杆菌（HPs）、胸膜肺炎放线杆菌（APP）共7种猪常见病原核酸均无反应,该方法特异性高。2.建立分子信标LAMP检测方法本试验根据实验室已有的ASFV的E183L基因序列,通过分子克隆试验构建PMD18-T-ASFV-E183L质粒,并将该质粒作为试验所需模板。通过在线软件Primer Explorer 5.0引物设计软件进行LAMP引物设计,并按照GC含量、Tm值、二级结构等参数,设计筛选出一套最佳的LAMP引物,并根据扩增区域设计,分子信标的长度、Tm值、GC含量、二级结构等条件筛选最佳的分子信标探针。初步建立MB-LAMP的检测体系,并对反应体系进行反应温度、分子信标浓度、外内引物比、d NTPs添加量、甜菜碱添加量、Mg SO₄添加量进行梯度实验。设计出环区长为13 bp,茎环总长为25 bp的分子信标,并确定实时荧光LAMP检测体系的最佳反应温度为65℃,分子信标探针最适浓度为15μmol/L,外内引物比例为1:8,Mg SO₄最适添加量为4 mmol/L,d NTPs最佳添加量为1.4 mmol/L,Bst 2.0 DNA聚合酶添加量为12 U/m L,甜菜碱最适添加量为0.1mol/L。该体系反应效率最高,最低检测浓度可达500 coipes/μL,与CSFV、PCV、PRRSV、PEDV、PRV、HPs、APP)共7种猪常见病原均无反应,该方法特异性高。本研究建立了实时荧光LAMP方法及分子信标LAMP方法,这两种方法敏感性好,特异性强,方便快捷,为我国ASFV的检测提供参考。