【摘 要】
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目的:研究RASSF1A基因转染对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用及其可能作用机制.方法:利用脂质体转染技术将RASSF1A基因导入肺腺癌细胞A549,应用Westernblotting鉴定经G418筛选
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目的:研究RASSF1A基因转染对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用及其可能作用机制.方法:利用脂质体转染技术将RASSF1A基因导入肺腺癌细胞A549,应用Westernblotting鉴定经G418筛选后获得的克隆,建立高表达RASSF1A基因的肺腺癌A549细胞株.MTT法测定RASSF1A基因转染前后A549细胞的生长曲线,平板克隆形成实验和流式细胞仪检测转染前后细胞周期的改变,观察RASSF1A基因转染对A549细胞生长特性的影响.采用Westernblotting分别检测RASSF1 A基因转染前后A549细胞p65在全细胞以及核内的表达;应用RT-PCR检测p21 mRNA的表达,探讨RASSF1A基因的作用机制.结果:1、成功建立高表达RASSF1A基因的肺腺癌A549细胞株;2、RASSF1A-A549细胞生长速度明显低于A549、pcDNA3.0-A549细胞;RASSF1A-A549细胞的克隆形成率为13.0％,低于A549(18.7％)、pcDNA3.0-A549细胞(18.3％)(P<0.05);3、与A549、pcDNA3.0-A549细胞相比,pcDNA3.0-RASSF1A-A549细胞G1/G0期细胞百分数明显增多(90.57％)(P<0.05);4、与A549、pcDNA3.0-A549细胞相比,RASSF1A-A549细胞核内p65蛋白表达明显降低,而全细胞p65蛋白表达未见明显变化;5、与A549、pcDNA3.0-A549细胞相比,RASSF1A-A549细胞p21mRNA表达增加.结论:1、成功建立高表达RASSF1A基因的肺腺癌A549细胞株.2、RASSF1A基因能明显抑制肺腺癌细胞A549的生长,可能是肺癌的侯选抑制基因.3、RASSF1A基因有可能通过抑制P65的活化和诱导p21 WAF1表达抑制肺腺癌细胞A549生长.
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