小盐芥总DNA导入紫薇的研究

来源 :南京林业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:ciancomjy
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本文在研究紫薇的生物学特性的基础上,将小盐芥总DNA通过花粉管通道导入紫薇,获得耐盐转化幼苗。 (1)生殖生物学特性。苯胺蓝染色法显示,从授粉到花粉萌发不足0.5h,开花后24h花粉管进入子房进行受精,由此确定花粉管通道导入外源基因的最佳时机是开花后22~24h。此外,紫薇花粉量大,萌发率高,大量花粉管穿过花柱进入子房,子房内胚珠多数,为外源DNA的进入提供更多的通道和机遇。 (2)花粉活力。碘-碘化钾法和过氧化物酶法可以根据染色深浅准确判断花粉活力的强弱。 (3)种子萌发和育苗。水和化学试剂浸种都能够促进平皿中紫薇种子萌发,其中45℃温水恒温4h、共浸泡24h的种子萌发率最高。相同处理的种子在基质中的出苗率均低于平皿中的发芽率。 (4)盐胁迫对种子萌发及幼苗的影Ⅱ向。0.1%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%NaCl溶液抑制紫薇种子萌发。0.1%NaCl是3~4cm高幼苗的最适胁迫。 (5)DNA提取及RAPD-PCR反应条件的初步优化。SDS-高盐低pH法适合提取盐生植物DNA;用CTAB浸提前先用缓冲溶液洗去多糖适合紫薇叶片DNA的提取,且65℃温育0.5h、5%PVPP效果最佳。RAPD-PCR的关键因素是模板的有效浓度。 (6)小盐芥总DNA导入紫薇。利用直接滴加和切花柱后滴加共获得8106粒转化种子。0.3%NaCl溶液浇灌1个月后,共得到12棵耐盐幼苗。
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