流感病毒的核蛋白(nucleoprotein, NP)高度保守,具有型特异性,能够诱导产生细胞介导的免疫应答,从而起到保护作用,抵抗不同亚型流感病毒的攻击。本研究主要利用杆状病毒表面展示技术,使用杆状病毒GP64蛋白的信号肽(signal peptide, SP)和胞质尾(cytoplasmic tail, CT),展示了甲型流感病毒(A/Hubei/1/2010H5H1)的NP蛋白,并对该NP蛋白的免疫原性和保护机制进行了探讨。利用RT-PCR技术,从A/Hubei/1/2010H5N1禽流感病毒中扩增获得NP基因,并通过重叠PCR技术,将NP基因与杆状病毒GP64的SP和CT串联,获得SP-NP-CT基因。将串联基因克隆至杆状病毒转移载体pFastBac Dual,获得重组质粒pFastBac Dual-SP-NP-CT。接下来将重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素,庆大霉素和四环素三重抗生素筛选后,获得重组穿梭质粒SP-NP-CT-Bac。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒NP-Bac。纯化重组病毒NP-Bac,利用Western blot试验和免疫电镜试验对杆状病毒表面展示的NP蛋白进行检测及定位。定量NP蛋白,进行动物免疫实验和攻毒实验(攻击25ul10405TCID50/ml A/PR/8/34H1N1流感病毒),对该NP蛋白的免疫原性和保护性进行了评价。Western blot试验证明NP蛋白在Sf9昆虫细胞中获得了有效的表达。免疫电镜试验显示NP蛋白己成功展示在杆状病毒表面。ELISA结果证明NP疫苗可以诱导产生高水平的IgG抗体。ELISPOT结果筛选出4条肽(Pep7：NP49-66LSDYEGRLIQNSITIERM; Pep8:NP57-74IQNSITIERMVLSAFDER; Pep55:NP433-450TEGRTSDMRTEIIKMMES和Pep56:NP441-458RTEIIKMMESA-RPEDLSF),实际包括两个NP表位(NP57-66IQNSITIERM和NP441-450RTEIIKMMES)可以诱导小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ,同时证明NP蛋白也可以诱导产生IFN-Y。利用Pep8,Pep56和NP蛋白作为刺激原进行流式细胞试验,对抗原特异性T细胞进行了检测,结果证明Pep8,Pep56和NP均可刺激CD4+和CD8+诱导产生IFN-γ,主要以CD8+诱导为主,Pep56诱导能力最强。攻毒实验证明：该疫苗能够降低小鼠肺病毒载量(P<0.001),减轻肺组织损伤,降低体重下降率,具有50%的交叉保护作用。本研究利用杆状病毒表面展示技术展示的NP蛋白,不仅可以诱导产生体液免疫反应,还可以产生细胞介导的免疫反应,能够通过降低病毒载量起到交叉保护作用,抵抗不同亚型流感病毒的攻击。