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[目的]:本研究在于模拟脑胶质瘤所生存的低氧微环境,通过倒置显微镜观察胶质瘤细胞在低氧下的形态,检测1%氧浓度对脑胶质瘤细胞凋亡的影响,并应用免疫荧光及Western Blot技术对HIF-1a进行定量检测,检查低氧下不同时间梯度及细胞密度对HIF-1α表达的影响,并在体外实验中运用RNA干扰技术,沉默低氧诱导因子-1,观察其对低氧下胶质瘤的增殖、凋亡的影响。为进一步研究以HIF-1为靶点治疗胶质瘤提供实验和理论依据。[方法]:1、通过低氧培养箱模拟低氧微环境,通过倒置显微镜下观察和Hoechest染色、MTT检测低氧对胶质瘤细胞增殖凋亡的影响;在低氧(1%02)培养箱中培养4h-72h。通过western blot检查T98G细胞在低氧条件下4h-72h低氧诱导因子-1a表达变化.2、通过平时的T98G细胞培养、计数,设计一组细胞密度梯度并于低氧(1%02浓度下)处理24h,通过Western blot定量分析HIF-1a表达变化。3、采用脂质体转染法进行HIF-1a SiRNA质粒转染胶质瘤细胞系T98G细胞,运用Western blot技术在蛋白水平检测感染后稳定细胞系干扰的有效性。4、选取有效的SiRNA质粒转染T98G细胞,分别设为干扰组和空白对照,于1%02和21%氧浓度下培养24h、48h、72h、96h、120h,MTT检测各组细胞存活及增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。[结果]1、正常脑胶质瘤细胞T98G于1%氧浓度下培养与21%氧浓度下培养,倒置显微镜下观察和Hoechest染色未见明显细胞凋亡,MTT检测低氧组与常氧组均呈增殖状态。1%氧浓度培养T98G细胞株4h、6h、12h、24h(<24h),HIF-1α蛋白表达快速升高,24h、48h、72h(>24h),HIF-1a蛋白表达是逐渐下降的。2、在不同细胞密度对T98G细胞HIF-1a表达的影响中,其中8.5万个细胞/Cm2密度的T98G细胞HIF-1a表达最高,细胞密度过高或过低都会导致HIF-1α表达降低。3、脂质体法包裹HIF-1α-SHRNA转染T98G细胞,经过G418筛选后,HIF-1α蛋白表达抑制率较高,可达至92.15%。4、Hoechest染色、流式细胞仪检测1%氧浓度下下干扰组和空白对照组细胞均无明显凋亡,MTT检测发现,低氧干扰组较低氧对照组增殖缓慢(P<0.05),常氧干扰组细胞较低氧干扰组生长好(P<0.05)。[结论]1%低氧微环境不能诱导脑胶质瘤细胞发生凋亡;在1%02浓度低氧微环境中,T98G细胞低氧处理在24小时以内,其HIF-1α蛋白的表达是快速升高,T98G细胞低氧处理24h、48h、72h,其HIF-1α的表达是逐渐降低的。在低氧下其汇合度至95%左右HIF-1α的表达最高,细胞密度过高或过低均会降低HIF-1α的表达。干扰沉默T98G细胞HIF-1α并不能诱导T98G细胞凋亡,却能降低T98G细胞的增殖速度。