RNA干扰沉默低氧诱导因子-1a对低氧条件下人脑胶质瘤凋亡影响的前期研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bababa666
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
[目的]:本研究在于模拟脑胶质瘤所生存的低氧微环境,通过倒置显微镜观察胶质瘤细胞在低氧下的形态,检测1%氧浓度对脑胶质瘤细胞凋亡的影响,并应用免疫荧光及Western Blot技术对HIF-1a进行定量检测,检查低氧下不同时间梯度及细胞密度对HIF-1α表达的影响,并在体外实验中运用RNA干扰技术,沉默低氧诱导因子-1,观察其对低氧下胶质瘤的增殖、凋亡的影响。为进一步研究以HIF-1为靶点治疗胶质瘤提供实验和理论依据。[方法]:1、通过低氧培养箱模拟低氧微环境,通过倒置显微镜下观察和Hoechest染色、MTT检测低氧对胶质瘤细胞增殖凋亡的影响;在低氧(1%02)培养箱中培养4h-72h。通过western blot检查T98G细胞在低氧条件下4h-72h低氧诱导因子-1a表达变化.2、通过平时的T98G细胞培养、计数,设计一组细胞密度梯度并于低氧(1%02浓度下)处理24h,通过Western blot定量分析HIF-1a表达变化。3、采用脂质体转染法进行HIF-1a SiRNA质粒转染胶质瘤细胞系T98G细胞,运用Western blot技术在蛋白水平检测感染后稳定细胞系干扰的有效性。4、选取有效的SiRNA质粒转染T98G细胞,分别设为干扰组和空白对照,于1%02和21%氧浓度下培养24h、48h、72h、96h、120h,MTT检测各组细胞存活及增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。[结果]1、正常脑胶质瘤细胞T98G于1%氧浓度下培养与21%氧浓度下培养,倒置显微镜下观察和Hoechest染色未见明显细胞凋亡,MTT检测低氧组与常氧组均呈增殖状态。1%氧浓度培养T98G细胞株4h、6h、12h、24h(<24h),HIF-1α蛋白表达快速升高,24h、48h、72h(>24h),HIF-1a蛋白表达是逐渐下降的。2、在不同细胞密度对T98G细胞HIF-1a表达的影响中,其中8.5万个细胞/Cm2密度的T98G细胞HIF-1a表达最高,细胞密度过高或过低都会导致HIF-1α表达降低。3、脂质体法包裹HIF-1α-SHRNA转染T98G细胞,经过G418筛选后,HIF-1α蛋白表达抑制率较高,可达至92.15%。4、Hoechest染色、流式细胞仪检测1%氧浓度下下干扰组和空白对照组细胞均无明显凋亡,MTT检测发现,低氧干扰组较低氧对照组增殖缓慢(P<0.05),常氧干扰组细胞较低氧干扰组生长好(P<0.05)。[结论]1%低氧微环境不能诱导脑胶质瘤细胞发生凋亡;在1%02浓度低氧微环境中,T98G细胞低氧处理在24小时以内,其HIF-1α蛋白的表达是快速升高,T98G细胞低氧处理24h、48h、72h,其HIF-1α的表达是逐渐降低的。在低氧下其汇合度至95%左右HIF-1α的表达最高,细胞密度过高或过低均会降低HIF-1α的表达。干扰沉默T98G细胞HIF-1α并不能诱导T98G细胞凋亡,却能降低T98G细胞的增殖速度。
其他文献
兰州在春秋、战国以前(约公元前4000—前722年)属雍州地,为羌戎部族据有。至秦昭王二十七年(前280年)秦霸西戎,始置陇西郡、治狄道(今临洮),兰州属陇西郡辖。西汉昭帝始元六
目的探讨CT检查在诊断和鉴别诊断脐尿管占位性病变方面的价值。方法根据临床病理证实的24例脐尿管占位性病变患者的CT影像学特征,分析其大小、部位、形态、性质、Retzius间隙
【正】 在萨特各方面思想的诸种研究中,有关其伦理思想的探讨显得较为薄弱,但是,自六十年代以来,这种探讨的趋势不断加强,在二十多年中发表了不少专著和论文。其中,较早系统
目的:探讨在人乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1与EZH23′UTR调控DNMT1及EZH2转录后表达水平,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法:首先利用实时定量PCR技
目的探究临床药师对于抗菌药物合理应用产生的影响。方法随机选取2015年1月-2015年12月我院收治的42例接受抗菌药物治疗患者作为对照组,未接受临床药师干预,再随机选取2016年
随着《全国牛羊肉生产发展规划》及《云南省高原特色农业的发展规划》制定。为我县黑山羊养殖带来重要的发展机遇期,依靠资源为依托、科技为先导、项目为支撑,通过对养殖户技术
《小组工作》是社会工作的基础课与必修课,是社会工作三大方法之一,是一门特别强调实践环节,实践应用的实务技能课,教学中应特别注重让学生将教材知识转化为实务能力,同时这
主办侦查员制度是一种岗位责任制,探索并建立主办侦查员制度,目的是要落实办案质量终身责任制,从而构筑起侦查办案与检察、审判有机统一、相互衔接的刑事司法责任体系。结合
实验目的通过体外实验,研究二甲双胍对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭性的影响;探讨二甲双胍在此中可能的分子靶点,初步证实二甲双胍抑制人肝癌细胞SMMC-7721的侵袭性。实验方法体外培
水下爆炸的计算研究在军事领域、工程领域有广泛的应用前景。在军事领域,水雷和深水炸弹的研制需要对相应的水下爆炸波传播和超压峰值进行计算研究。在工程领域,港口航道的建