麻黄连翘赤小豆汤抗I型变态反应的作用及作用机理实验研究

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目的:致敏阶段和发敏阶段是Ⅰ型变态反应性疾病的发病两个主要阶段。体内特异性IgE含量升高在致敏阶段发挥着重要作用,而肥大细胞脱颗粒在发敏阶段发挥着重要作用。根据Ⅰ型变态反应性疾病上述发病特点,本课题利用血清药理学的方法,从特异性IgE的生成,T_H1、T_H2细胞因子活性及基因表达情况、T淋巴细胞凋亡及肥大细胞脱颗粒、组胺释放等方面,系统地探讨麻黄连翘赤小豆汤抗Ⅰ型变态反应性疾病的作用机制。 方法:①.麻黄连翘赤小豆汤对特异性IgE的影响:运用721型分光光度计观察被动皮肤过敏反应试验中蓝斑的OD值。②.麻黄连翘赤小豆汤对T淋巴细胞及相关T_H1、T_H2细胞因子的影响:首先制备含药血清,运用气相色谱的方法对其中的某些成分进行定性检测。试验分为正常组、模型组、5%中药血清组。10%中药血清组、地塞米松血清组,共6组。运用OVA致敏小鼠,无菌取小鼠脾脏,分离T淋巴细胞,分别加入ConA、OVA及相应血清,共同培养72h后,运用ELISA法检测培养上清中IL-4、IL-13、IFN-γ的蛋白含量;运用原位杂交法检测T淋巴细胞中IL-4mRNA、IFN-γmRNA表达情况,运用电镜,TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。③.麻黄连翘赤小豆汤对肥大细胞脱颗粒的影响:观察肥大细胞脱颗粒试验中脱颗粒肥大细胞数,并用荧光法检测组胺释放量。 结果:①对特异性IgE生成的影响:PCA实验结果表明,经中药治疗后,蓝斑明显缩小(P<0.05或0.01),其中,大剂量组效果最明显,与西药组的作用效果相当(P>0.05),说明了该方抑制Ⅰ型变态反应的可能机理之一是抑制体内特异性IgE的生成。②制备并检测含药血清:采用了气相色谱法对中药血清中麻黄碱进行定性检测。结果表明,含药血清样品中的确含有中药成分。说明含药血清制备成功,可以运用制备好的血清进行下一步的实验。③对T_H1、T_H2类细胞因子的蛋白活性及基因表达的影响:ELISA结果表明,麻黄连翘赤小豆汤含药血清能减少IL-4的蛋白含量(P<0.05或0.01),增加IFN-γ的蛋白含量(F<0.05或0.01),但对IL-13的蛋白含量的影响不大(P>0.05)。原位杂交结果显示经含药血清培养后,IL-4mRNA表达降低(P<0.05或0.01),而IFN-γmRNA表达上升(P<0.05或0.01),其中,10%中药血清组的作用与地塞米松血清组相比较,无显著性差异(P>0.05)。结果表明,麻黄连翘赤小豆汤能抑制特异性IgE生成,这种作用可能与其抑制抑制致敏小鼠T细胞中IL-4mRNA的表达,且能抑制其蛋白活性;促进IFN-γmRNA的表达,并能增加其蛋白活性相关。但对IL-13的蛋白活性影响不大。④对致敏小鼠T细胞凋亡的影响:电镜及TUNEL法均检测到经中药治疗后,T细胞多发生明显的凋亡。结合上述实验,我什1推测这种凋亡的T淋巴细胞很可能就是THZ型T淋巴细胞。⑤对肥大细胞脱颗粒数及组胺释放程度的影响:麻黄连翘赤小豆汤合药血清能抑制肥大细胞脱颗粒,减少组胺的释放。说明麻黄连翘赤小豆汤确有保护肥大细胞,抑制组胺释放作用。 结论:麻黄连翘赤小豆汤能抑制机体的特异性 IgE的生成;抑制人 类细胞因子IL叶的蛋白活性,抑制IL-4H RNRNA的表达,促进THI类细胞因子IFN-Y的蛋白活性,增强 IFN-Y mRNA的表达;诱导 T淋巴细胞,主要是 T。2型 T淋巴细胞凋亡;抑制抗原攻击后的肥大细胞脱颗粒,减少组胺的分泌,这些指标覆盖了IgE介导的速发性超敏反应的发病机理的主要环节,表明该方对变态反应的改善是通过多途径实现的。
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